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固相萃取

2017-01-06 11:22:07
admin
4484
最后编辑:逗点生物 于 2017-01-09 09:47:37
简介:对于反相、正相和吸附型固相萃取柱来说,被萃取样品的质量不超SPE柱填料的5%;离子交换型的固相萃取柱,必须考虑离子交换的容量。

固相萃取柱(SPE 柱)常用问答

固相萃取柱规格的选择,上样量与洗脱体积如何确定?

对于反相、正相和吸附型固相萃取柱来说,被萃取样品的质量不超SPE柱填料的5%;离子交换型的固相萃取柱,必须考虑离子交换的容量。


SPE柱上样容量和洗脱体积的选择
规格 最大上样量 最小洗脱体积
100mg/1mL 5mg 250µL
200mg/3mL 10mg 500µL
500mg/6mL 25mg 1.2mL
1g/6mL 50mg 2.4mL

常见问题及解决方法

出现问题 可能原因 解决办法
回收率低 柱子类型选择不当 选择对目标组分具有更强选择性的SPE柱
柱子活化不当 正相填料: 正己烷等,1-3倍柱床体积。
离子交换填料: 甲醇、乙腈或异丙醇等与水互溶的极性溶剂,1倍柱床体积
洗脱溶剂选择不当 选择极性更强的溶剂进行洗脱
洗脱不完全 增加洗脱的溶剂用量
是否过载 选择更大的SPE柱或减少上样量
重现性差 上样前柱子出现干涸 重新活化SPE柱
洗脱液流速过快 控制洗脱液流速,≤1mL/min
目标物发生降解 选择合适SPE柱或加入适当的缓冲液保证目标物的稳定性
SPE柱过载 选择更大的SPE柱或减少上样量
淋洗溶剂洗脱能力过强 降低淋洗溶液强度
杂质过多 杂质与目标物同时被洗脱 选择合适的淋洗液,洗脱之前先去除杂质
选择对目标组分专属更强的SPE柱
杂质来自SPE柱 活化前先用洗脱液冲洗柱子
SPE柱流速过 慢或堵塞 样品存在较多不溶物 上样前对样品进行离心或选择溶解度更大的溶剂
样品黏度过大 对样品进行稀释或选择溶解度更大的溶剂