1 样品提取 

1) 称取猪肉2.0g于50mL离心管中，加入浓度为100ppm氟尼辛D3内标物40μL，再2.0mL 0.1M Na 2 EDTA溶液，涡旋混匀 1min，冰浴超声提取10min，于4℃ 9000r/min下离心5min，移 上清液于另一15mL离心管中； 

2) 再加入7.0mL 2%甲酸乙腈于50mL离心管中，涡旋5min，于 4℃ 9000r/min下离心5min，合并两次上清液，用2%甲酸乙腈定 容至10mL； 

3) 将合并定容后的上清液，于4℃ 9000r/min下离心5min，待净 化。

2 样品净化 

1) 上样：取2.5mL待净化液过柱，重力作用下洗脱，收集流出液； 

2) 洗脱：再加625μL 80%乙腈水进行二次洗脱，收集流出液，施 加真空排空液体，合并两次流出液； 

3) 将0.5mL样品洗脱液和0.3mL H2O加入到样品瓶中，涡旋混匀， 过0.22μm有机滤膜供上机测试

3 标曲配制 

用空白基质配制标曲，内标法定量，标曲浓度范围0.5~100ppb。 

4. 仪器测试条件（仅供参考） 

色谱条件 

仪器：UPLC/MS/MS (Thermo Fisher TQS Endura ) 

色谱柱： ® CommaSil ODS(2.1mm×50 mm, 1.8 μm) 

柱温：30 ℃ 

进样量：8 μL 

流速：0.4 mL/min 

流动相：A: 水(0.1%甲酸） B: 甲醇（0.1%甲酸） 

表1 梯度洗脱

质谱条件 离子源：HESI    电喷雾电压：3500 V 

鞘气压力：40 arb              辅气压力：2 arb 

离子传输管：380 ℃          辅气温度：420 ℃

5 注意事项 

1. 为防止由螯合引起的四环素化合物的损失，使用0.1M Na2EDTA 缓冲液进行水溶液萃取。 

2. 为改善与固体残留物的相分离，进一步降低温度对部分目标物 的影响（如四环素类），建议使用低温离心(4℃)。 

3. 为进一步确保蛋白及部分固体残留物的有效去除，建议使用高 速离心(9000r/min)。 

4. 建议采用加入内标物，采用空白基质配制标曲，有利于校正目 标分析物的回收率。

实验结果 

表2. 不同品牌猪肉中19种兽残加标回收实验结果（加标浓度 16ng/mL，n=3）