单增李斯特菌动力试验、溶血试验与CAMP试验简介

单核细胞增生李斯特氏菌，常简称单增李斯特菌，拉丁名为 Listeria monocytogenes，是食品微生物检验中重点关注的食源性致病菌。选择性平板上出现可疑菌落后，通常需要进一步进行纯化、初筛和确认鉴定。动力试验、溶血试验和CAMP试验，是传统鉴定流程中较有代表性的表型试验，分别从运动性、β溶血特征和协同溶血反应三个角度辅助判断菌株是否符合单增李斯特菌特征。

截至2026年6月，GB 4789.30-2025《食品安全国家标准 食品微生物学检验 单核细胞增生李斯特氏菌检验》已代替GB 4789.30-2016，标准规定了食品中单增李斯特菌的定性检验、平板计数和MPN计数方法。新版标准修订内容包括增加选择性培养基、修改增菌液、检验程序和鉴定方法等，检测工作应以现行标准文本为依据。

一、动力试验：伞状生长是典型特征之一

单增李斯特菌为革兰氏阳性、无芽孢短杆菌，在适宜温度下可形成鞭毛并表现出运动性。其运动性具有温度相关特点：在20～25℃培养时运动较明显，常见轻微旋转或翻滚样运动；在37℃条件下鞭毛形成减少，运动性可能减弱。因此，动力观察不能脱离培养温度和菌龄判断。

传统动力试验可将TSA-YE平板上的疑似纯培养物穿刺接种于半固体动力培养基，如SIM培养基，在适宜条件下培养后观察生长形态。典型李斯特菌可沿穿刺线向外扩散，形成类似“伞状”或倒伞状的扩散生长。这一现象提示菌株具有动力，是李斯特菌属初步鉴定的重要线索。

需要注意的是，动力阳性并不等于单增李斯特菌阳性。部分其他李斯特菌也可有运动性，而培养温度不合适、培养物老化、接种量异常或培养基琼脂浓度偏高，都可能造成动力表现不典型。因此，动力试验应作为组合鉴定项目之一，与菌落形态、染色镜检、糖发酵、溶血和确认试验共同判断。

二、溶血试验：观察β溶血能力，但不能单独定种

单增李斯特菌通常具有β溶血能力，在羊血琼脂平板上可形成狭窄、透明的溶血环。溶血试验的基本目的，是判断可疑菌株是否具备与单增李斯特菌相符的溶血特征。原资料中提到在7%羊血琼脂平板上进行刺种观察，设置阳性和阴性对照，这一思路是正确的：没有对照的溶血观察容易误判，尤其是弱溶血菌株或血平板背景不够清晰时。

不同李斯特菌的溶血表现存在差异。单增李斯特菌和斯氏李斯特菌可产生狭窄溶血环，无害李斯特菌通常不溶血，伊氏李斯特菌可产生较大的透明溶血区。但这种差异不能作为单独定种依据。溶血强弱受菌株差异、培养基血液质量、平板厚度、接种方式、培养时间和观察光线影响较大。ISO 11290-1:2017也提示，少数单增李斯特菌菌株在规定条件下可能不表现典型β溶血或CAMP阳性反应，因此不能仅凭单项表型试验否定疑似菌株。

溶血试验更适合作为“是否进入进一步确认”的辅助判断。若可疑菌株来自典型选择性平板，且镜检、运动性和糖发酵特征均支持李斯特菌，即使溶血较弱，也不宜简单排除，应结合CAMP试验、分子方法、质谱或其他标准确认方法综合判断。

三、CAMP试验：利用协同溶血辅助鉴别

CAMP试验是李斯特菌鉴定中的经典辅助试验。其原理是某些细菌产生的因子可与指示菌的溶血因子发生协同作用，使接种线交界附近的溶血增强。李斯特菌检测中常用金黄色葡萄球菌和马红球菌作为指示菌。可疑李斯特菌垂直接种于两种指示菌接种线之间，但不与其接触，经培养后观察接近不同指示菌处的溶血增强情况。

单增李斯特菌通常在靠近金黄色葡萄球菌接种线处出现溶血增强；斯氏李斯特菌也可在金黄色葡萄球菌附近出现增强反应；伊氏李斯特菌则通常在靠近马红球菌处出现更明显的溶血增强。CAMP试验因此可用于辅助区分部分李斯特菌种。ISO资料也提到，当溶血试验结果难以解释时，可推荐CAMP试验用于证明溶血与李斯特菌溶血素活性有关。

需要强调的是，CAMP试验不是孤立的“定种按钮”。金黄色葡萄球菌菌株并非全部适合作为CAMP试验指示菌，马红球菌状态、血平板质量、接种距离、培养时间和读板角度都会影响结果。实际检验应使用经过验证的指示菌和阳性、阴性对照，确保结果可解释。

四、三类试验在鉴定流程中的作用

从鉴定逻辑看，动力试验偏向“属水平初筛”，溶血试验偏向“致病相关表型观察”，CAMP试验偏向“种间辅助鉴别”。三者组合使用，可以提高传统表型鉴定的可靠性，但最终报告仍应符合现行标准要求。

五、操作与判读中的常见误区

第一，不能把“有动力”直接等同于单增李斯特菌。李斯特菌属内多种细菌可表现出运动性，其他非目标菌也可能在半固体培养基中出现扩散生长。动力试验只能提示可疑方向，不能替代确认鉴定。

第二，不能把“无明显溶血”直接等同于阴性。部分单增李斯特菌溶血较弱，血平板质量不佳或观察条件不合适时，狭窄溶血环可能不易识别。对高风险样品或其他特征高度符合的菌株，应继续做确认试验。

第三，CAMP试验必须有对照。阳性对照可验证血平板和指示菌是否有效，阴性对照可帮助判断背景溶血和非特异性增强。若对照结果异常，本次CAMP试验结果不应作为判断依据。

第四，TSA-YE纯培养非常关键。若疑似菌落未纯化，混合菌会干扰动力、溶血和CAMP结果，造成假阳性或假阴性。选择性平板上的可疑菌落应先在TSA-YE等非选择性营养培养基上纯化，再进行后续鉴定。

六、与现代确认方法的衔接

传统表型试验仍有价值，尤其适合教学、基层实验室初筛和方法学理解。但在食品安全标准检测中，单增李斯特菌结果报告越来越强调标准化确认。GB 4789.30-2025解读材料显示，新版标准修订了鉴定方法，并与国际标准接轨，以提高方法的选择性、可操作性和准确性。 在具备条件的实验室中，PCR、MALDI-TOF MS和商品化生化鉴定系统可与传统表型试验互补，用于提高确认效率和结果一致性。

因此，动力试验、溶血试验和CAMP试验的合理定位是：作为传统鉴定链条中的辅助证据，而不是最终报告的唯一依据。尤其是在监管检测、产品放行和争议样品复核中，应以现行标准规定的确认路径为准。

小结

单增李斯特菌的动力试验、溶血试验和CAMP试验分别反映运动性、β溶血能力和协同溶血反应。典型单增李斯特菌可在半固体培养基中呈伞状扩散生长，在羊血琼脂上产生狭窄β溶血环，并在CAMP试验中靠近金黄色葡萄球菌处出现溶血增强。三者组合可显著提高初步鉴定的判断效率，但不能替代标准确认方法。实际检验应在纯培养基础上进行，并设置可靠对照，最终结果应依据GB 4789.30-2025等现行标准综合判定。