公共场所拖鞋微生物检验方法：真菌总数检测要点

公共场所拖鞋常见于宾馆、酒店、浴室、足浴、游泳场馆等场景，直接接触人体足部皮肤。如果清洗、消毒、干燥或存放不当，鞋内与脚趾接触部位容易残留皮屑、水分和微生物，成为霉菌、酵母菌及其他微生物污染的风险点。因此，对公共场所可重复使用拖鞋进行微生物检测，是评价其清洗消毒效果和卫生状况的重要手段。

旧资料中使用“霉菌和酵母菌总数”的说法，现行标准中更常表述为“真菌总数”。根据GB/T 18204.4-2025，公共用品用具真菌总数是指在沙氏琼脂培养基上经28℃±1℃、3～5天培养后形成的真菌菌落数；该标准适用于公共场所公共用品用具微生物指标的检验，包括细菌总数、真菌总数、大肠菌群、金黄色葡萄球菌和β-溶血性链球菌等项目。

一、检测原理

拖鞋真菌总数检测采用表面涂抹采样和平板倾注培养法。检测人员用灭菌棉拭子在拖鞋鞋内与脚趾接触的规定面积内均匀涂抹，将附着在鞋内表面的微生物转移到无菌生理盐水中，经过振摇和系列稀释后，取适宜稀释度接种平皿，再倾注沙氏琼脂培养基培养。

沙氏琼脂含较高浓度葡萄糖，pH偏酸，适合霉菌和酵母菌生长，并能在一定程度上抑制部分细菌干扰。培养后形成的菌落数可用于估算拖鞋表面真菌污染水平，结果通常以CFU/50 cm²报告。需要注意的是，该方法反映的是可培养真菌数量，不等同于全部微生物数量，也不能直接鉴定具体真菌种类。

二、采样部位与采样面积

拖鞋检测的关键是采样部位。现行标准对鞋类采样规定为：在每只鞋的鞋内与脚趾接触处，取5 cm×5 cm，即25 cm²面积范围，均匀涂抹采样；每只鞋采集1份样品，每双鞋共采集2份样品。

旧资料中“一双拖鞋为一份样品、总涂抹面积50 cm²”的表达，与现行标准“每只鞋各采1份、每双鞋共2份”的表述不完全一致。实际检测和报告时，应按现行标准或委托方指定标准执行，避免采样面积、样品份数和结果单位不一致。

三、样品处理与稀释

采样时，应随机抽取清洗消毒后待使用的公共拖鞋，并全程无菌操作。棉拭子先用10 mL无菌生理盐水中的部分液体润湿，再在规定部位来回均匀涂抹。采样后将棉拭子放回剩余生理盐水中，剪去手接触部分，并尽快送检；GB/T 18204.4-2025规定采样后应在4小时内送检。

实验室接收样品后，将含棉拭子的生理盐水管充分振摇，使附着在棉拭子上的真菌孢子和酵母细胞尽量分散到液体中。随后按10倍递增方式制备系列稀释液。旧资料中“手心震荡100次、吸管反复吹吸50次”的做法属于早期操作描述，现行实验室更推荐使用涡旋混合器等设备提高混匀一致性。

四、接种与培养

根据样品污染程度，选择2～3个适宜稀释度，每个稀释度取1 mL样品匀液分别加入2个无菌平皿，同时设置空白对照。再将溶化并冷却至约45℃的沙氏琼脂培养基倾注平皿，轻轻转动混匀，待琼脂凝固后倒置培养。

现行标准推荐在28℃±1℃培养5天，逐日观察，并于第5天记录结果；若真菌数量过多，可在第3天计数并注明培养时间。旧资料中“25～28℃培养3天后开始观察，共观察一周”的表述可作为历史方法理解，但正式检测应以现行标准规定为准。

五、菌落计数与结果报告

真菌总数计数时，应优先选择菌落数在10～150 CFU之间的平板。霉菌菌落通常呈绒毛状、絮状、粉末状或放射状，酵母菌菌落多呈圆形、湿润、乳白色或奶油色。若霉菌蔓延生长覆盖整个平板，应记录为菌落蔓延，不能简单按普通分散菌落计数。

结果计算时，根据平板平均菌落数、稀释倍数和采样面积换算为CFU/50 cm²。现行标准公式为：

A = T × b / k

其中，A为一定面积的真菌总数，单位为CFU/50 cm²；T为平板平均菌落数；b为稀释倍数；k为按采样面积换算出的系数。若采样面积为50 cm²，则k=1；若采样面积为25 cm²，则k=1/2。

旧资料中“m = n × k”的公式过于简化，未充分体现采样面积换算规则。实际报告时，应按现行标准计算和修约。若空白对照平板出现菌落生长，本次检测结果应判为无效，需要查找污染原因并重新检测。

六、培养基选择：虎红培养基与沙氏琼脂的差异

旧资料中提到使用虎红培养基，即孟加拉红类培养基。该类培养基常用于霉菌和酵母菌计数，特点是可抑制霉菌菌落过度扩散，便于计数。但在GB/T 18204.4-2025中，公共用品用具真菌总数检测规定使用沙氏琼脂培养基，配方为蛋白胨、葡萄糖、琼脂和纯水，pH为5.6±0.2，并经115℃高压灭菌15分钟。

因此，企业知识库文章可说明虎红培养基属于旧方法或其他真菌计数方法中常见培养基，但公共场所拖鞋真菌总数检测应优先采用现行标准规定的沙氏琼脂。若企业内部验证后采用替代培养基，应完成方法适用性或等效性确认，不能直接替代标准培养基用于法定或监督检测。

七、质量控制与常见误差

拖鞋真菌总数检测容易受采样、混匀、培养基状态和培养条件影响。采样面积不准确、棉拭子涂抹不充分、样品送检时间过长、稀释不均匀、培养基温度过高或平板表面冷凝水过多，都会影响检测结果。真菌孢子易成团，如果样品液混匀不足，可能导致同一稀释度两块平板差异较大。

检测时应设置空白对照，并关注培养基无菌性、培养温度、平板干湿度和菌落蔓延情况。对于污染严重样品，应选择更高稀释度，以避免菌落过密无法计数；对于污染较低样品，应保留低稀释度平板，以降低漏检风险。结果评价则应结合GB 37488-2019《公共场所卫生指标及限值要求》或现行适用卫生标准进行。GB/T 18204.4与GB 37488配套使用，用于规范公共场所相关样品采集和实验室检测。

小结

公共场所拖鞋真菌总数检测的核心流程为：规定部位涂抹采样、无菌生理盐水洗脱、系列稀释、沙氏琼脂倾注培养、28℃±1℃培养并计数，最终以CFU/50 cm²报告。旧资料中的“霉菌和酵母菌总数”“虎红培养基”“一双拖鞋为一份样品”等表述具有历史方法背景，但现行检测应以GB/T 18204.4-2025为依据。规范采样面积、培养基选择、培养时间、计数范围和结果换算，是保证公共场所拖鞋微生物检测结果可靠的关键。