细菌性食物中毒样品采集:现场调查中最关键的一步
- 2026-06-30 11:53:19
- 逗点生物
细菌性食物中毒样品采集:现场调查中最关键的一步
细菌性食物中毒,也可归入食源性疾病事件调查范围,常与被病原菌或其毒素污染的食品有关。实验室能否查明病因,往往不只取决于检测技术,更取决于现场样品是否采得及时、采得准确、保存运输是否规范。许多事件最终无法明确病原,并不是实验室“检不出来”,而是剩余食品已被丢弃、患者已用药、样品未冷藏、采样容器污染或送检信息不完整。
现行食品微生物检验应遵循 GB 4789.1-2016《食品安全国家标准 食品微生物学检验 总则》 的基本要求。国家卫生健康委截至 2025 年 9 月的食品安全国家标准目录仍列有 GB 4789.1-2016;该标准强调,微生物样品采集应遵循随机性、代表性原则,采样过程应无菌操作,防止外来污染。
一、采样前要明确:采什么、为什么采
细菌性食物中毒样品采集不是“能拿什么就拿什么”,而是要根据发病时间、临床表现、可疑食品、加工流程和进食史确定采样重点。例如,短时间内以呕吐为主,应重点考虑金黄色葡萄球菌肠毒素、蜡样芽胞杆菌呕吐毒素等;以腹痛、腹泻为主,应重点考虑沙门氏菌、副溶血性弧菌、致泻大肠埃希氏菌、产气荚膜梭菌、蜡样芽胞杆菌腹泻型等;若有发热、血便或严重脱水,应优先采集患者粪便并尽快送检。
采样的核心目标有三个:第一,找到可疑中毒食品;第二,证明患者、食品、环境或从业人员之间存在同源病原线索;第三,为后续病原分离、毒素检测、分型溯源和风险控制提供证据。因此,现场采样必须与流行病学调查同步进行,不能等到食品处理完、场所清洗消毒后再补采。
二、采样箱应准备哪些物品?
采样用品应满足无菌、防漏、可标识、可冷藏和便于运输的要求。一次食源性疾病事件调查通常需要同时采集食品、粪便、呕吐物、环境涂抹、从业人员样品和水样,因此采样箱内应按类别准备。
| 类别 | 常用物品 | 用途 |
|---|---|---|
| 食品采样 | 无菌采样袋、无菌广口瓶、无菌吸管、无菌勺、刀、剪、镊子、夹子 | 采集固体、半固体、液体食品及原料 |
| 涂抹采样 | 无菌棉拭子、无菌生理盐水管、采样模板、涂抹管 | 采集设备、容器、案板、刀具、餐具、手部等表面样品 |
| 粪便采样 | 采便管、Cary-Blair 运送培养基、密封袋 | 采集患者粪便或肛拭子 |
| 呕吐物采样 | 无菌平皿、无菌广口瓶、无菌棉拭子 | 采集呕吐物及污染表面涂抹样品 |
| 水样采集 | 无菌水样瓶,必要时含硫代硫酸钠 | 采集饮用水、加工用水、冰、冷却水等 |
| 个人防护 | 工作服、隔离衣、帽子、口罩、手套、靴套 | 防止污染样品,也保护采样人员 |
| 现场辅助用品 | 75%乙醇、酒精棉球、记号笔、标签、封条、记录表、冷藏箱、冰袋 | 消毒、编号、封样、记录和冷链运输 |
原文中的“C-B保存液”应规范写作 Cary-Blair 运送培养基,主要用于肠道病原菌样本的保存和运输,不是所有病原菌的通用保存液。样品容器、培养基和采样工具应有批号、有效期和无菌状态记录;采样箱应定期检查,消耗品使用后及时补齐,过期或包装破损的无菌物品不得使用。
三、培养基和运送体系如何准备?
现场调查常用的培养基和运送体系应根据可疑病原选择,不能机械套用一套培养基。常见准备思路如下:
| 可疑病原或目标菌 | 常用增菌或运送体系 | 说明 |
|---|---|---|
| 沙门氏菌 | 缓冲蛋白胨水、选择性增菌液等 | 适用于食品和粪便中沙门氏菌分离 |
| 志贺氏菌 | GN 增菌液、Cary-Blair 运送培养基 | 粪便样品应尽快送检,避免菌体死亡 |
| 致泻大肠埃希氏菌 | 肠道增菌液或相应标准方法培养基 | 需结合毒力基因检测或血清学确认 |
| 副溶血性弧菌 | 3% NaCl 碱性蛋白胨水、嗜盐菌相关培养基 | 水产品、海产品和盐渍食品事件重点考虑 |
| 霍乱弧菌 | 碱性蛋白胨水、Cary-Blair 运送培养基 | 疑似霍乱应按法定传染病和生物安全要求处理 |
| 金黄色葡萄球菌 | 7.5% NaCl 肉汤、Baird-Parker 平板 | 食品、从业人员鼻咽/手部/伤口样品常用 |
| 蜡样芽胞杆菌 | 胰酪胨大豆多粘菌素肉汤、MYP 平板 | 米饭、米粉、淀粉类和调理食品重点考虑 |
| 产气荚膜梭菌 | 硫乙醇酸盐培养基、厌氧培养体系 | 肉制品、大锅菜、长时间保温食品重点考虑 |
| 单核细胞增生李斯特菌 | 李斯特菌增菌液及选择性分离培养基 | 冷藏即食食品、乳制品和肉制品重点考虑 |
| 空肠/结肠弯曲菌 | 弯曲菌增菌液、微需氧培养体系 | 禽肉、未熟肉类和交叉污染事件重点考虑 |
培养基准备应符合 GB 4789 系列方法和 GB 4789.28 对培养基质量控制的要求。现场采样人员一般不应在污染现场进行复杂培养操作,重点是正确采样、低温保存、快速送检;具体增菌和分离应在符合生物安全要求的实验室内完成。
四、食品样品采集:优先采剩余食品
食品样品是查明中毒来源最直接的证据。现场应优先采集中毒患者实际食用后的剩余食品,尤其是同一批次、同一加工时间、同一容器中的剩余物。若剩余食品已被处理,应采集食品包装、容器残留物,或用无菌生理盐水洗涤盛装过可疑食品的容器,收集洗涤液送检。
食品样品采集重点包括:可疑中毒食品、同批次留样、同一加工场所其他即食食品、半成品、原料、调味料、冰块、饮用水和加工用水。对于熟食、凉菜、盒饭、糕点、乳制品、水产品、米饭、米粉、肉制品等高风险食品,应尽量保留足够样品量,既满足细菌分离,也满足毒素或分子检测需要。
采样时应避免只取表面或只取看起来异常的部分。细菌污染可能分布不均,应尽量从不同部位取样并充分代表原食品状态。若食品已经混合或分装,应记录分装时间、储存温度、加工批次和食用人群。
五、环境涂抹样品:用于追踪污染环节
环境涂抹样品适用于追踪食品加工、储存和分装过程中的污染来源。可采集食品接触面和非食品接触面,包括案板、刀具、抹布、容器、夹子、勺子、灌装口、操作台、冰箱内壁、排水沟、手套、从业人员手部等。
常规方法是用无菌棉拭子蘸取无菌生理盐水或相应中和液,在规定面积内反复涂抹,再将拭子置入采样管中。若表面有明显残留物,也可用无菌刀、镊子或刮片取样。涂抹样品尤其适用于怀疑熟制后再污染、交叉污染、设备清洗消毒不彻底或人员操作污染的事件。
需要注意,环境样品阴性不能排除污染曾经发生。现场若已经清洗消毒,病原菌检出率会明显降低,因此环境涂抹应尽量在现场处置、清洗和消毒前完成。
六、患者粪便样品:细菌性食物中毒调查的核心样品
患者粪便样品对细菌性食物中毒诊断非常关键,尤其在剩余食品无法采集或食品检测阴性时,粪便样品往往是确认病原的重要依据。CDC 对食源性暴发病原确认的样本采集建议中提到,细菌性病因调查可采集 10 名患者的新鲜粪便样品,并可收集呕吐物和疑似食品样品;病毒性和寄生虫性暴发也有相应样本量建议。
实际现场中,应优先采集发病早、症状典型、未用药或用药较少、腹泻严重患者的粪便。较大规模事件可扩大采样人数,原文提出“至少采集 20 名病人”可作为较大事件的经验性做法,但具体数量应结合事件规模、病例数和检测能力确定。
即使患者已经服药,也不应放弃粪便采集。抗菌药物可能降低病原检出率,但仍有可能检出病原菌或毒力基因。若无法取得粪便,可采集肛拭子并置于 Cary-Blair 运送培养基中,但肛拭子样本量较少,通常不如新鲜粪便理想。
七、呕吐物样品:短潜伏期事件尤其重要
若患者出现明显呕吐,应尽量采集新鲜呕吐物。呕吐物对金黄色葡萄球菌肠毒素、蜡样芽胞杆菌呕吐型毒素以及部分化学性中毒调查都有价值。若呕吐物已被清理,可对被污染的地面、衣物、容器、垃圾袋或清洁工具进行涂抹采样,并详细记录样品来源。
呕吐物采集后应使用无菌、防漏容器密封,低温送检。若怀疑毒素型食物中毒,不应只做活菌培养,还应根据事件特点考虑毒素检测。因为部分毒素在食品或呕吐物中存在时,活菌未必还能检出。
八、食品加工人员样品:用于判断污染来源
食品加工人员可能是金黄色葡萄球菌、肠道致病菌、诺如病毒等污染来源。怀疑人员污染时,可采集从业人员粪便、肛拭子、鼻拭子、咽拭子、手部涂抹样品以及有感染灶皮肤或伤口分泌物。
采样对象应包括直接接触可疑食品的厨师、分装人员、备餐人员、配送人员和清洁人员。采样时应同时调查其近期腹泻、呕吐、发热、皮肤化脓、手部伤口、上呼吸道症状和是否带病上岗。若食品中、患者中和从业人员中分离到相同病原,后续可通过分子分型进一步判断关联性。
九、水样和其他样品:不要漏掉加工用水和冰
当怀疑饮用水、加工用水、冰块、清洗水、冷却水或水产品养殖水污染时,应采集水样。水样应使用无菌水样瓶;若采集含余氯的自来水,应使用含硫代硫酸钠的采样瓶中和余氯,避免运输过程中继续杀灭微生物造成假阴性。
其他可采样品包括原料、调味料、半成品、食品添加物、包装材料、餐饮具、垃圾桶残留物、清洗消毒液、抹布、拖把和留样柜中的食品留样。食源性事件复杂多变,采样范围应服务于调查假设,而不是机械固定。
十、样品保存与送检:冷链、编号和记录不能缺
样品采集后应立即编号,每个样品应有唯一标识,记录样品名称、来源、采样地点、采样时间、采样人员、样品状态、保存条件、可疑食品加工信息和拟检项目。样品应严密封闭,防止泄漏、污染和交叉混淆。
食品、粪便、呕吐物和环境涂抹样品通常应冷藏运输,尽快送达实验室。原文提出“4 小时内送至实验室”是合理的现场快速送检要求;若因距离较远无法做到,应全程冷链并记录实际温度和送达时间。GB 4789.1 的原则是,在保存和运输过程中采取必要措施,防止样品中原有微生物数量变化,保持样品原有状态。
送检单必须信息完整,包括样品名称、编号、来源、数量、重量或体积、采样条件、采样时间、送检时间、检验项目、事件基本情况、患者症状、进食史和送样人。实验室接收样品时应核对编号、包装完整性、温度状态和样品量,并记录接收时间。若发现容器泄漏、样品污染、温度失控、编号不清或采样条件可能影响结果,应在记录和报告中说明。
十一、不同样品的采集重点总结
| 样品类型 | 采集重点 | 保存运输要点 | 主要用途 |
|---|---|---|---|
| 剩余食品 | 患者实际食用食品、同批次留样、容器残留 | 密封、冷藏、尽快送检 | 确认可疑食品和病原来源 |
| 原料和半成品 | 同批次原料、调味料、半成品 | 按样品性质冷藏或常温保存 | 判断污染发生在加工前还是加工后 |
| 粪便 | 症状典型患者,新鲜粪便优先 | 冷藏或使用运送培养基 | 分离病原菌、检测毒力基因 |
| 呕吐物 | 新鲜呕吐物及污染表面 | 防漏容器,冷藏送检 | 毒素型事件和短潜伏期事件调查 |
| 环境涂抹 | 食品接触面、工具、餐具、手部、抹布 | 涂抹管密封冷藏 | 追踪交叉污染和后污染环节 |
| 从业人员样品 | 粪便、鼻咽、手部、伤口 | 按样品类型冷藏或运送培养基 | 判断人员携带和操作污染 |
| 水样 | 饮用水、加工用水、冰、冷却水 | 无菌水样瓶,必要时中和余氯 | 判断水源性污染 |
| 对照样品 | 未食用同批次食品、正常人样品、空白样品 | 与病例样品一致 | 辅助判断污染关联性 |
十二、常见错误与纠正
第一,剩余食品被丢弃后才采样。应在接报后尽快封存可疑食品、留样和同批次原料。
第二,只采食品,不采患者粪便。若食品已被加热、丢弃或污染分布不均,粪便可能是唯一能明确病原的样品。
第三,样品未冷藏。常温放置会使部分细菌继续增殖,也可能使脆弱病原死亡,导致结果失真。
第四,容器不无菌或封口不严。采样容器污染会导致假阳性,泄漏则会造成交叉污染和生物安全风险。
第五,只写“菜样”“粪便”“水样”,不记录来源。样品没有准确来源、时间和编号,就难以用于溯源分析。
第六,现场已清洗消毒后才涂抹。环境涂抹应尽量在处置前完成,否则阴性结果解释价值有限。
第七,怀疑毒素型事件却只做活菌培养。金黄色葡萄球菌肠毒素、蜡样芽胞杆菌呕吐毒素等可在活菌减少后仍存在,应根据事件特征考虑毒素检测。
结语
细菌性食物中毒样品采集的关键,是在最短时间内采集最有证据价值的样品,并保证样品不被污染、不发生明显微生物数量变化、不丢失来源信息。食品样品能指向中毒载体,患者粪便和呕吐物能指向病原,环境和从业人员样品能指向污染环节,水样和原料样品能帮助判断污染来源。
对现场调查人员而言,采样不是简单“装样送检”,而是一次证据链建立过程。只有做到采样及时、对象准确、操作无菌、冷链完整、记录清楚,实验室检测结果才有解释价值,也才能真正服务于病因判定、风险控制和后续整改。




