细菌性食物中毒样品采集:现场调查中最关键的一步

2026-06-30 11:53:19
逗点生物
简介

细菌性食物中毒样品采集:现场调查中最关键的一步

细菌性食物中毒,也可归入食源性疾病事件调查范围,常与被病原菌或其毒素污染的食品有关。实验室能否查明病因,往往不只取决于检测技术,更取决于现场样品是否采得及时、采得准确、保存运输是否规范。许多事件最终无法明确病原,并不是实验室“检不出来”,而是剩余食品已被丢弃、患者已用药、样品未冷藏、采样容器污染或送检信息不完整。

现行食品微生物检验应遵循 GB 4789.1-2016《食品安全国家标准 食品微生物学检验 总则》 的基本要求。国家卫生健康委截至 2025 年 9 月的食品安全国家标准目录仍列有 GB 4789.1-2016;该标准强调,微生物样品采集应遵循随机性、代表性原则,采样过程应无菌操作,防止外来污染。

一、采样前要明确:采什么、为什么采

细菌性食物中毒样品采集不是“能拿什么就拿什么”,而是要根据发病时间、临床表现、可疑食品、加工流程和进食史确定采样重点。例如,短时间内以呕吐为主,应重点考虑金黄色葡萄球菌肠毒素、蜡样芽胞杆菌呕吐毒素等;以腹痛、腹泻为主,应重点考虑沙门氏菌、副溶血性弧菌、致泻大肠埃希氏菌、产气荚膜梭菌、蜡样芽胞杆菌腹泻型等;若有发热、血便或严重脱水,应优先采集患者粪便并尽快送检。

采样的核心目标有三个:第一,找到可疑中毒食品;第二,证明患者、食品、环境或从业人员之间存在同源病原线索;第三,为后续病原分离、毒素检测、分型溯源和风险控制提供证据。因此,现场采样必须与流行病学调查同步进行,不能等到食品处理完、场所清洗消毒后再补采。

二、采样箱应准备哪些物品?

采样用品应满足无菌、防漏、可标识、可冷藏和便于运输的要求。一次食源性疾病事件调查通常需要同时采集食品、粪便、呕吐物、环境涂抹、从业人员样品和水样,因此采样箱内应按类别准备。

类别 常用物品 用途
食品采样 无菌采样袋、无菌广口瓶、无菌吸管、无菌勺、刀、剪、镊子、夹子 采集固体、半固体、液体食品及原料
涂抹采样 无菌棉拭子、无菌生理盐水管、采样模板、涂抹管 采集设备、容器、案板、刀具、餐具、手部等表面样品
粪便采样 采便管、Cary-Blair 运送培养基、密封袋 采集患者粪便或肛拭子
呕吐物采样 无菌平皿、无菌广口瓶、无菌棉拭子 采集呕吐物及污染表面涂抹样品
水样采集 无菌水样瓶,必要时含硫代硫酸钠 采集饮用水、加工用水、冰、冷却水等
个人防护 工作服、隔离衣、帽子、口罩、手套、靴套 防止污染样品,也保护采样人员
现场辅助用品 75%乙醇、酒精棉球、记号笔、标签、封条、记录表、冷藏箱、冰袋 消毒、编号、封样、记录和冷链运输

原文中的“C-B保存液”应规范写作 Cary-Blair 运送培养基,主要用于肠道病原菌样本的保存和运输,不是所有病原菌的通用保存液。样品容器、培养基和采样工具应有批号、有效期和无菌状态记录;采样箱应定期检查,消耗品使用后及时补齐,过期或包装破损的无菌物品不得使用。

三、培养基和运送体系如何准备?

现场调查常用的培养基和运送体系应根据可疑病原选择,不能机械套用一套培养基。常见准备思路如下:

可疑病原或目标菌 常用增菌或运送体系 说明
沙门氏菌 缓冲蛋白胨水、选择性增菌液等 适用于食品和粪便中沙门氏菌分离
志贺氏菌 GN 增菌液、Cary-Blair 运送培养基 粪便样品应尽快送检,避免菌体死亡
致泻大肠埃希氏菌 肠道增菌液或相应标准方法培养基 需结合毒力基因检测或血清学确认
副溶血性弧菌 3% NaCl 碱性蛋白胨水、嗜盐菌相关培养基 水产品、海产品和盐渍食品事件重点考虑
霍乱弧菌 碱性蛋白胨水、Cary-Blair 运送培养基 疑似霍乱应按法定传染病和生物安全要求处理
金黄色葡萄球菌 7.5% NaCl 肉汤、Baird-Parker 平板 食品、从业人员鼻咽/手部/伤口样品常用
蜡样芽胞杆菌 胰酪胨大豆多粘菌素肉汤、MYP 平板 米饭、米粉、淀粉类和调理食品重点考虑
产气荚膜梭菌 硫乙醇酸盐培养基、厌氧培养体系 肉制品、大锅菜、长时间保温食品重点考虑
单核细胞增生李斯特菌 李斯特菌增菌液及选择性分离培养基 冷藏即食食品、乳制品和肉制品重点考虑
空肠/结肠弯曲菌 弯曲菌增菌液、微需氧培养体系 禽肉、未熟肉类和交叉污染事件重点考虑

培养基准备应符合 GB 4789 系列方法和 GB 4789.28 对培养基质量控制的要求。现场采样人员一般不应在污染现场进行复杂培养操作,重点是正确采样、低温保存、快速送检;具体增菌和分离应在符合生物安全要求的实验室内完成。

四、食品样品采集:优先采剩余食品

食品样品是查明中毒来源最直接的证据。现场应优先采集中毒患者实际食用后的剩余食品,尤其是同一批次、同一加工时间、同一容器中的剩余物。若剩余食品已被处理,应采集食品包装、容器残留物,或用无菌生理盐水洗涤盛装过可疑食品的容器,收集洗涤液送检。

食品样品采集重点包括:可疑中毒食品、同批次留样、同一加工场所其他即食食品、半成品、原料、调味料、冰块、饮用水和加工用水。对于熟食、凉菜、盒饭、糕点、乳制品、水产品、米饭、米粉、肉制品等高风险食品,应尽量保留足够样品量,既满足细菌分离,也满足毒素或分子检测需要。

采样时应避免只取表面或只取看起来异常的部分。细菌污染可能分布不均,应尽量从不同部位取样并充分代表原食品状态。若食品已经混合或分装,应记录分装时间、储存温度、加工批次和食用人群。

五、环境涂抹样品:用于追踪污染环节

环境涂抹样品适用于追踪食品加工、储存和分装过程中的污染来源。可采集食品接触面和非食品接触面,包括案板、刀具、抹布、容器、夹子、勺子、灌装口、操作台、冰箱内壁、排水沟、手套、从业人员手部等。

常规方法是用无菌棉拭子蘸取无菌生理盐水或相应中和液,在规定面积内反复涂抹,再将拭子置入采样管中。若表面有明显残留物,也可用无菌刀、镊子或刮片取样。涂抹样品尤其适用于怀疑熟制后再污染、交叉污染、设备清洗消毒不彻底或人员操作污染的事件。

需要注意,环境样品阴性不能排除污染曾经发生。现场若已经清洗消毒,病原菌检出率会明显降低,因此环境涂抹应尽量在现场处置、清洗和消毒前完成。

六、患者粪便样品:细菌性食物中毒调查的核心样品

患者粪便样品对细菌性食物中毒诊断非常关键,尤其在剩余食品无法采集或食品检测阴性时,粪便样品往往是确认病原的重要依据。CDC 对食源性暴发病原确认的样本采集建议中提到,细菌性病因调查可采集 10 名患者的新鲜粪便样品,并可收集呕吐物和疑似食品样品;病毒性和寄生虫性暴发也有相应样本量建议。

实际现场中,应优先采集发病早、症状典型、未用药或用药较少、腹泻严重患者的粪便。较大规模事件可扩大采样人数,原文提出“至少采集 20 名病人”可作为较大事件的经验性做法,但具体数量应结合事件规模、病例数和检测能力确定。

即使患者已经服药,也不应放弃粪便采集。抗菌药物可能降低病原检出率,但仍有可能检出病原菌或毒力基因。若无法取得粪便,可采集肛拭子并置于 Cary-Blair 运送培养基中,但肛拭子样本量较少,通常不如新鲜粪便理想。

七、呕吐物样品:短潜伏期事件尤其重要

若患者出现明显呕吐,应尽量采集新鲜呕吐物。呕吐物对金黄色葡萄球菌肠毒素、蜡样芽胞杆菌呕吐型毒素以及部分化学性中毒调查都有价值。若呕吐物已被清理,可对被污染的地面、衣物、容器、垃圾袋或清洁工具进行涂抹采样,并详细记录样品来源。

呕吐物采集后应使用无菌、防漏容器密封,低温送检。若怀疑毒素型食物中毒,不应只做活菌培养,还应根据事件特点考虑毒素检测。因为部分毒素在食品或呕吐物中存在时,活菌未必还能检出。

八、食品加工人员样品:用于判断污染来源

食品加工人员可能是金黄色葡萄球菌、肠道致病菌、诺如病毒等污染来源。怀疑人员污染时,可采集从业人员粪便、肛拭子、鼻拭子、咽拭子、手部涂抹样品以及有感染灶皮肤或伤口分泌物。

采样对象应包括直接接触可疑食品的厨师、分装人员、备餐人员、配送人员和清洁人员。采样时应同时调查其近期腹泻、呕吐、发热、皮肤化脓、手部伤口、上呼吸道症状和是否带病上岗。若食品中、患者中和从业人员中分离到相同病原,后续可通过分子分型进一步判断关联性。

九、水样和其他样品:不要漏掉加工用水和冰

当怀疑饮用水、加工用水、冰块、清洗水、冷却水或水产品养殖水污染时,应采集水样。水样应使用无菌水样瓶;若采集含余氯的自来水,应使用含硫代硫酸钠的采样瓶中和余氯,避免运输过程中继续杀灭微生物造成假阴性。

其他可采样品包括原料、调味料、半成品、食品添加物、包装材料、餐饮具、垃圾桶残留物、清洗消毒液、抹布、拖把和留样柜中的食品留样。食源性事件复杂多变,采样范围应服务于调查假设,而不是机械固定。

十、样品保存与送检:冷链、编号和记录不能缺

样品采集后应立即编号,每个样品应有唯一标识,记录样品名称、来源、采样地点、采样时间、采样人员、样品状态、保存条件、可疑食品加工信息和拟检项目。样品应严密封闭,防止泄漏、污染和交叉混淆。

食品、粪便、呕吐物和环境涂抹样品通常应冷藏运输,尽快送达实验室。原文提出“4 小时内送至实验室”是合理的现场快速送检要求;若因距离较远无法做到,应全程冷链并记录实际温度和送达时间。GB 4789.1 的原则是,在保存和运输过程中采取必要措施,防止样品中原有微生物数量变化,保持样品原有状态。

送检单必须信息完整,包括样品名称、编号、来源、数量、重量或体积、采样条件、采样时间、送检时间、检验项目、事件基本情况、患者症状、进食史和送样人。实验室接收样品时应核对编号、包装完整性、温度状态和样品量,并记录接收时间。若发现容器泄漏、样品污染、温度失控、编号不清或采样条件可能影响结果,应在记录和报告中说明。

十一、不同样品的采集重点总结

样品类型 采集重点 保存运输要点 主要用途
剩余食品 患者实际食用食品、同批次留样、容器残留 密封、冷藏、尽快送检 确认可疑食品和病原来源
原料和半成品 同批次原料、调味料、半成品 按样品性质冷藏或常温保存 判断污染发生在加工前还是加工后
粪便 症状典型患者,新鲜粪便优先 冷藏或使用运送培养基 分离病原菌、检测毒力基因
呕吐物 新鲜呕吐物及污染表面 防漏容器,冷藏送检 毒素型事件和短潜伏期事件调查
环境涂抹 食品接触面、工具、餐具、手部、抹布 涂抹管密封冷藏 追踪交叉污染和后污染环节
从业人员样品 粪便、鼻咽、手部、伤口 按样品类型冷藏或运送培养基 判断人员携带和操作污染
水样 饮用水、加工用水、冰、冷却水 无菌水样瓶,必要时中和余氯 判断水源性污染
对照样品 未食用同批次食品、正常人样品、空白样品 与病例样品一致 辅助判断污染关联性

十二、常见错误与纠正

第一,剩余食品被丢弃后才采样。应在接报后尽快封存可疑食品、留样和同批次原料。

第二,只采食品,不采患者粪便。若食品已被加热、丢弃或污染分布不均,粪便可能是唯一能明确病原的样品。

第三,样品未冷藏。常温放置会使部分细菌继续增殖,也可能使脆弱病原死亡,导致结果失真。

第四,容器不无菌或封口不严。采样容器污染会导致假阳性,泄漏则会造成交叉污染和生物安全风险。

第五,只写“菜样”“粪便”“水样”,不记录来源。样品没有准确来源、时间和编号,就难以用于溯源分析。

第六,现场已清洗消毒后才涂抹。环境涂抹应尽量在处置前完成,否则阴性结果解释价值有限。

第七,怀疑毒素型事件却只做活菌培养。金黄色葡萄球菌肠毒素、蜡样芽胞杆菌呕吐毒素等可在活菌减少后仍存在,应根据事件特征考虑毒素检测。

结语

细菌性食物中毒样品采集的关键,是在最短时间内采集最有证据价值的样品,并保证样品不被污染、不发生明显微生物数量变化、不丢失来源信息。食品样品能指向中毒载体,患者粪便和呕吐物能指向病原,环境和从业人员样品能指向污染环节,水样和原料样品能帮助判断污染来源。

对现场调查人员而言,采样不是简单“装样送检”,而是一次证据链建立过程。只有做到采样及时、对象准确、操作无菌、冷链完整、记录清楚,实验室检测结果才有解释价值,也才能真正服务于病因判定、风险控制和后续整改。