单增李斯特菌的实验室危害及预防措施

单增李斯特菌，即单核细胞增生李斯特氏菌（Listeria monocytogenes），是食品微生物检验中常见的食源性致病菌。与沙门氏菌、大肠埃希氏菌 O157:H7 等高关注病原菌相比，单增李斯特菌并不是最常见的实验室获得性感染病原体，但它具有明确的致病性，且对孕妇、新生儿、老年人及免疫功能低下人群风险较高。因此，实验室在开展分离、增菌、鉴定、菌种保藏和阳性对照操作时，应按生物安全二级要求进行管理。

一、单增李斯特菌的实验室危害来源

单增李斯特菌可通过污染食品、环境样品、临床样本、阳性菌株、增菌液和培养物进入实验室操作流程。一般情况下，实验室感染并不常见，但在样品处理、菌液混匀、离心、涡旋、移液、接种、刮取菌苔、开启污染容器或处理泄漏事故时，若防护不当，仍可能发生暴露。

从感染途径看，直接摄入是单增李斯特菌最重要的感染方式。因此，实验室内严禁饮食、吸烟、化妆、接触隐形眼镜和用手触摸口鼻。除摄入外，高浓度气溶胶、飞溅液滴、污染锐器、破损皮肤、眼结膜和黏膜接触也可能造成感染风险。对于增菌后的高浓度培养物，风险高于原始样品，操作时应更加谨慎。

二、哪些操作更容易产生风险

单增李斯特菌实验中的主要风险并不来自“看见菌落”本身，而来自可形成气溶胶、液滴或污染面的操作。例如，涡旋混匀、强力吹打、离心管开盖、移液枪快速排液、接种环灼烧带液菌苔、玻璃器皿破裂、培养液溅洒等，均可能造成局部污染或人员暴露。

离心操作尤其需要注意。若离心管密封不良、管体破裂或开盖过早，可能产生不可见的气溶胶污染。因此，处理疑似或确认含有单增李斯特菌的液体培养物时，应使用密封性良好的离心管和离心桶；发生异常时，不应立即打开离心机，而应等待气溶胶沉降后再按污染事故流程处理。

三、生物安全等级与个人防护要求

单增李斯特菌通常应按生物安全二级实验室要求操作。实验室应具备相应的防污染设施、消毒灭菌条件、废弃物处理流程和人员培训制度。凡涉及活菌培养物、疑似阳性样品、高浓度菌悬液或可能产生气溶胶的操作，应优先在Ⅱ级生物安全柜内完成。

操作人员应穿实验服，必要时使用一次性隔离衣或防渗透防护服；接触样品、培养物和污染器具时应佩戴手套。存在飞溅风险时，应佩戴护目镜、面屏或其他眼面部防护用品。手套并不能替代洗手，操作结束、脱去手套后、离开实验室前均应进行手卫生。

孕妇应避免接触单增李斯特菌活菌、疑似阳性样品及其污染物。该菌对孕期人群的健康风险更高，因此实验室排班和岗位安排中应主动规避相关暴露。

四、溅洒事故的处理方法

发生单增李斯特菌培养物或疑似污染样品溅洒时，应立即停止操作，提醒周围人员，避免踩踏和扩散污染。若溅洒发生在生物安全柜内，应保持生物安全柜继续运行；若发生在开放台面或地面，应先让可能形成的气溶胶自然沉降，再进入污染区域处理。

处理时应穿戴实验服、手套和眼面部防护用品。可用吸水纸、纸巾或一次性吸附材料轻轻覆盖污染区域，避免直接擦拭造成二次气溶胶。随后加入有效消毒剂，常用方法为使用含有效氯的消毒液处理。原文提到的 1% 次氯酸钠溶液可用于污染区域消毒，但实际使用时应确认有效氯浓度、配制时间和有机物负荷；消毒液应由污染区边缘向中心缓慢加入，确保覆盖全部污染面。接触时间一般不少于 30 min，之后再用工具夹取污染吸附材料，置入感染性废弃物容器中，最后对台面或地面进行二次清洁消毒。

如溅洒涉及破碎玻璃或锐器，严禁徒手拾取，应使用镊子、夹子、刷子和簸箕等工具处理。若污染物接触眼睛、黏膜、破损皮肤或发生针刺伤，应立即冲洗或处理暴露部位，并按实验室职业暴露流程报告和评估。

五、废弃物与污染物处理

所有接触过单增李斯特菌的培养皿、培养管、吸头、离心管、接种环、手套、擦拭材料和样品残余物，均应视为感染性废弃物。废弃前必须进行有效去污染处理，常用方式包括高压蒸汽灭菌、化学消毒或按规定焚烧处理。

高压蒸汽灭菌是实验室处理污染培养物和一次性耗材的常用方法。液体培养物灭菌时应注意容器容量、装液量和排气条件，避免因装液过满导致灭菌不彻底或灭菌过程中溢出。化学消毒适用于台面、设备表面、少量液体污染物和不可高压灭菌材料，但需保证消毒剂浓度、接触时间和覆盖范围。

污染物未经灭菌或消毒，不得直接倒入下水道、普通垃圾桶或开放环境中。灭菌后的废弃物也应按实验室和单位的感染性废弃物管理要求进行分类、包装、标识和转运。

六、菌种保存与运输管理

单增李斯特菌标准菌株、阳性分离株和疑似阳性培养物应存放在有明确标识的密封容器内，容器外应标明菌名、编号、保存日期、责任人和风险类别。冻存管、斜面管或培养皿应避免无标识、混放或长期敞口保存。

菌株保存区域应限制无关人员接触，并建立领用、传代、复苏、销毁记录。转移菌种或培养物时，应使用防泄漏的二级包装，避免在实验室公共区域裸露搬运。若需外送或跨区域转运，应按病原微生物菌毒种及感染性材料运输管理要求执行。

七、日常预防要点

单增李斯特菌实验室安全控制的核心，是减少摄入、气溶胶、飞溅和接触污染。日常操作中应做到：样品和培养物不开盖久置；移液时避免猛烈吹打；接种环带液时避免直接高温灼烧造成飞溅；离心前确认管盖密封；污染操作尽量在生物安全柜内完成；实验结束后及时消毒台面和设备表面；阳性培养物不在普通冰箱中与普通试剂混放。

实验人员还应熟悉本实验室的消毒剂种类、有效浓度、配制周期和适用范围。次氯酸钠等含氯消毒剂对有机物较敏感，污染物量大或蛋白质含量高时，应先覆盖吸附并保证足够消毒液用量和接触时间。酒精适用于清洁表面快速消毒，但对大量有机污染物或液体溅洒并不是最佳选择。

八、小结

单增李斯特菌的实验室获得性感染报道较少，但其致病性明确，且对孕妇和免疫功能低下人群风险更高。实验室应按生物安全二级要求管理，重点控制高浓度培养物、气溶胶、飞溅、污染锐器和废弃物处理环节。规范使用生物安全柜、个人防护用品、有效消毒剂和高压灭菌程序，是预防单增李斯特菌实验室暴露的关键。对于阳性菌株和疑似污染材料，应做到标识清楚、密封保存、规范转运、处理前先去污染，避免因操作细节疏忽造成实验室污染或人员暴露。