糖（醇、苷）类发酵试验及葡萄糖 O/F 试验

糖（醇、苷）类发酵试验是细菌生化鉴定中的基础项目。不同细菌具有不同的糖代谢酶系统，对葡萄糖、乳糖、蔗糖、麦芽糖、甘露醇、山梨醇、水杨苷等底物的利用能力不同，代谢后是否产酸、产气也存在差异。通过观察培养基颜色、气泡、裂隙等变化，可辅助判断细菌的属种特征。

这类试验广泛用于肠杆菌科、弧菌、葡萄球菌、链球菌、乳酸菌和非发酵菌等微生物鉴定。但糖发酵结果受培养基配方、指示剂、接种量、培养时间和菌株状态影响较大，不能脱离其他生化反应单独定种。

一、糖类发酵试验的基本原理

细菌分解糖类、醇类或糖苷类底物时，可产生有机酸、醇类、二氧化碳、氢气等代谢产物。若产酸，培养基 pH 降低，pH 指示剂发生酸性变色；若同时产气，可在液体发酵管的倒置 Durham 小管内出现气泡，或在半固体培养基中出现气泡、裂隙、顶起或培养基断裂现象。

常见底物包括单糖、双糖、多糖、糖醇和糖苷。不同底物的分解能力可反映细菌是否具有相应的转运系统和代谢酶。例如，大肠埃希氏菌通常可发酵乳糖产酸产气，而沙门氏菌通常不发酵乳糖；部分金黄色葡萄球菌可发酵甘露醇产酸；某些乳酸菌可分解七叶苷或水杨苷等糖苷类底物。

二、常见底物及鉴定意义

糖发酵试验的关键不是“能不能生长”，而是“是否利用特定底物并产生可检测的代谢变化”。有些细菌能在培养基中生长，但并不分解该糖；有些细菌早期产酸，后期因蛋白胨分解产碱，颜色可能发生回转。因此，判读时间必须符合方法要求。

三、糖发酵管的结果判断

糖发酵管通常含有基础营养成分、特定糖类底物和 pH 指示剂。接种纯培养菌后，在适宜条件下培养，观察培养基颜色变化和产气情况。

若细菌分解该底物产酸，培养基颜色转为酸性颜色，例如酚红指示剂由红色变黄色，溴甲酚紫由紫色变黄色。若不分解底物，培养基颜色通常不变；若细菌分解蛋白胨或氨基酸产生碱性物质，培养基可能呈碱性颜色。

产气结果通常通过 Durham 小管判断。倒置小管内出现明显气泡，表示产气阳性；无气泡则为产气阴性。半固体糖发酵培养基中，产气可表现为气泡、裂隙、培养基上浮或断裂。若培养基本身有气泡、装管不规范或灭菌后未排尽气体，可能影响产气判断。

结果可简要表示为：产酸产气、产酸不产气、不产酸不产气、产碱或弱反应。实际记录时应注明培养时间和培养温度，避免不同批次结果不可比。

四、葡萄糖代谢类型鉴别试验：O/F 试验

葡萄糖 O/F 试验又称氧化/发酵试验，用于判断细菌分解葡萄糖的代谢方式。它主要区分三类情况：细菌只在有氧条件下氧化利用葡萄糖；细菌在有氧和无氧条件下均能发酵葡萄糖；细菌不利用葡萄糖或主要分解蛋白胨产生碱性反应。

试验通常使用两支 O/F 培养基管，均穿刺接种待检菌。其中一支保持开放，代表有氧条件；另一支用无菌液体石蜡或凡士林覆盖培养基表面，形成相对无氧环境。培养后观察两管颜色变化。

若仅开放管变黄，封闭管不变，说明该菌只能在有氧条件下氧化利用葡萄糖，判为氧化型。若开放管和封闭管均变黄，说明该菌可发酵葡萄糖，判为发酵型。若两管均不变黄，说明不分解葡萄糖或反应惰性；若开放管上部变蓝或碱化，提示可能利用蛋白胨产碱。

五、O/F 试验结果判读表

O/F 试验常用于鉴别肠杆菌科细菌与非发酵革兰阴性杆菌。多数肠杆菌科细菌为发酵型；假单胞菌等部分非发酵菌常表现为氧化型；某些非糖分解菌则表现为不利用型或产碱反应。

六、影响试验结果的关键因素

糖发酵试验和 O/F 试验必须使用纯培养物。混合菌接种会导致结果无法解释。接种量过大可能带入碱性代谢产物或培养基残留，造成颜色异常；接种量过少则可能反应弱或延迟。

培养时间也非常关键。读数过早可能出现假阴性，读数过晚则可能因蛋白胨分解产碱而掩盖早期产酸结果。特别是糖含量较低、蛋白胨含量较高的培养基，长时间培养后更容易出现颜色回转。

O/F 试验中，封闭管的液体石蜡覆盖应足够，覆盖不足会导致氧气进入，使结果偏向氧化型；覆盖过早或培养基温度不合适，也可能影响菌体生长。穿刺接种应沿直线进入，避免搅动培养基造成氧扩散过多。

七、常见误区

第一，糖发酵阳性不是指“菌长得好”，而是指利用底物产生酸性变化。

第二，产酸和产气应分别记录。产酸阳性不一定产气阳性。

第三，O/F 试验不能只看开放管。必须比较开放管和封闭管结果。

第四，两管均不变黄不应直接称为“产碱型”。更准确应结合颜色变化判断为不利用葡萄糖、惰性或产碱反应。

第五，培养时间过长可能导致颜色回转，尤其是弱发酵或蛋白胨利用明显的细菌。

八、小结

糖（醇、苷）类发酵试验通过观察细菌对不同碳源的利用情况，判断其是否产酸、产气，是细菌生化鉴定的重要基础。葡萄糖 O/F 试验则进一步区分细菌利用葡萄糖的方式，是氧化型、发酵型，还是不利用或产碱反应。实际应用中，应严格控制纯培养、培养基质量、接种量、石蜡覆盖、培养时间和结果判读，并将糖发酵结果与其他生化试验综合分析，避免依靠单一反应作出菌种判断。