溶血试验与 CAMP 试验：原理、判读及应用

溶血试验是微生物鉴定中常用的表型试验之一，主要通过观察细菌在血琼脂平板上对红细胞的破坏情况，判断其溶血类型。许多链球菌、葡萄球菌、李斯特菌、弧菌和部分厌氧菌可产生不同程度的溶血现象，因此血平板不仅可支持营养要求较高的细菌生长，也常用于观察菌落形态和溶血特征。

需要注意的是，血平板上的 α、β、γ 溶血是对溶血现象的描述，而不是对所有细菌溶血毒素的统一命名。不同菌属产生的溶血因子不同，不能简单把“α 溶血”“β 溶血”与某一种固定毒素对应起来。

一、血平板溶血试验的基本原理

血琼脂平板通常是在营养基础较好的琼脂培养基中加入一定比例的无菌脱纤维血或抗凝血制成。常用血液来源包括羊血、马血、兔血等。不同动物红细胞对不同细菌溶血因子的敏感性不同，因此血源会影响溶血表现。例如，链球菌鉴别常用羊血或马血琼脂，葡萄球菌和其他细菌的溶血表现也可能因血源不同而有差异。

细菌若产生溶血素或其他破坏红细胞的因子，可在菌落周围形成不同类型的溶血环。根据红细胞破坏程度和颜色变化，通常分为 β 溶血、α 溶血和 γ 溶血。

二、α、β、γ 溶血的判读

β 溶血又称完全溶血，表现为菌落周围出现透明、清晰的溶血环，红细胞被较完全破坏。化脓性链球菌、部分无乳链球菌、部分金黄色葡萄球菌等可表现 β 溶血。

α 溶血又称不完全溶血，菌落周围呈草绿色、灰绿色或暗绿色环带，边缘常较模糊。这是红细胞部分破坏或血红蛋白氧化改变所致。肺炎链球菌和草绿色链球菌群常表现 α 溶血。

γ 溶血并不是真正溶血，而是指无明显溶血现象。菌落周围培养基颜色无明显变化，红细胞未出现可见破坏。

判读时应观察菌落周围培养基颜色、透明度和边界，而不是只看菌落本身。培养时间过短可能溶血不明显，培养过久又可能因菌落扩散、培养基干燥或代谢产物积累影响判断。

三、血琼脂平板的制备要点

血琼脂一般在基础培养基灭菌并冷却至适宜温度后，无菌加入血液并轻轻混匀，避免产生气泡和红细胞破裂。若培养基温度过高，加入血液后可能造成红细胞热损伤，使平板颜色异常或出现假性溶血背景；温度过低则琼脂易提前凝固，导致血液分布不均。

血平板应颜色均匀、表面平整、无明显气泡、无污染、无自发性溶血。若平板本身出现发暗、发绿、脱水、裂纹或大片背景溶血，不宜用于溶血结果判读。

对于特殊检测，有时采用双层血琼脂或薄层血琼脂，以增强溶血环观察。但无论采用哪种形式，都应保证血液质量、培养基 pH、琼脂浓度和培养条件稳定。

四、链球菌与葡萄球菌溶血判读的区别

链球菌鉴定中，α、β、γ 溶血通常直接用于描述血平板上的溶血类型。例如，β 溶血链球菌可进一步结合 Lancefield 分群、CAMP 试验、杆菌肽敏感性或其他方法鉴别；α 溶血链球菌则需进一步区分肺炎链球菌和草绿色链球菌群。

葡萄球菌也可在血琼脂上出现溶血，但其溶血表现受菌株、血源、培养时间和温度影响较大。金黄色葡萄球菌可产生多种溶血素，如 α、β、δ 等，其毒素名称与血平板上的 α/β 溶血分类并非完全对应。因此，在报告葡萄球菌溶血现象时，更建议描述为“透明溶血环”“不完全溶血环”“双层溶血”或“无溶血”，避免把现象与毒素名称混用。

五、CAMP 试验的原理

CAMP 试验又称加强溶血试验，主要用于检测某些细菌产生的 CAMP 因子。CAMP 因子是一种可扩散的胞外蛋白，可与金黄色葡萄球菌产生的 β 溶血素协同作用，使羊血琼脂上两种菌接近处出现增强溶血区。

在 B 群链球菌，即无乳链球菌（Streptococcus agalactiae）鉴定中，CAMP 试验具有经典意义。典型阳性结果是在待检菌与金黄色葡萄球菌划线接近处，出现箭头状或楔形增强溶血区。即使某些 B 群链球菌本身溶血较弱，CAMP 试验仍可能呈阳性。

六、CAMP 试验在李斯特菌鉴别中的应用

CAMP 试验也可用于李斯特菌属部分种的辅助鉴别。常见做法是用金黄色葡萄球菌和马红球菌作为指示菌，观察待检李斯特菌与指示菌接近处是否出现增强溶血。

通常情况下，单核细胞增生李斯特菌可与金黄色葡萄球菌产生增强溶血反应，而伊氏李斯特菌常与马红球菌产生更明显增强反应。该特征可辅助区分不同李斯特菌，但不能作为唯一鉴定依据。实际鉴定仍需结合菌落形态、革兰染色、运动性、糖发酵、生化反应和必要的分子或质谱鉴定。

原文提到羊血中可能存在影响李斯特菌检测的因素，因此可使用洗涤红细胞制备血琼脂以减少干扰。实际操作应依据相应标准方法或试剂说明执行。

七、CAMP 试验结果判读

CAMP 阳性通常表现为待检菌划线与金黄色葡萄球菌或马红球菌划线接近处出现局部增强溶血，形似箭头、楔形或半月形。若接近处无增强溶血，仅见各自菌线周围原有溶血或无明显变化，则判为阴性。

判读时要注意菌线之间距离。距离过远，扩散因子不能充分相互作用，可能出现假阴性；距离过近，菌落融合或溶血区重叠，又会影响形态判断。培养时间和血源也会影响结果，因此应设置阳性和阴性对照。

八、溶血试验与 CAMP 试验的应用价值

溶血试验的价值在于快速提供表型线索。它能提示某些菌群的可能范围，但不能单独完成菌种确认。例如，α 溶血不能直接判定为肺炎链球菌，β 溶血也不能直接判定为化脓性链球菌或金黄色葡萄球菌。CAMP 阳性也应结合其他鉴定项目确认。

九、常见问题与注意事项

第一，血源不同会影响溶血结果。不同动物红细胞对溶血因子敏感性不同，检测时应使用方法规定的血液来源。

第二，血平板质量会影响判读。过热加血、红细胞自溶、平板老化或背景变色均可能造成误判。

第三，α、β、γ 溶血是现象描述，不应简单等同于某种溶血毒素名称。

第四，CAMP 试验必须观察增强溶血区，而不是只看待检菌自身是否溶血。

第五，阳性结果需结合对照和其他试验。溶血和 CAMP 反应均属于辅助鉴别指标。

十、小结

溶血试验通过观察细菌在血琼脂平板上对红细胞的破坏情况，将结果分为 β 溶血、α 溶血和 γ 溶血，是链球菌、葡萄球菌、李斯特菌等微生物鉴定中的常用表型试验。CAMP 试验则利用某些菌产生的 CAMP 因子与指示菌溶血素的协同作用，观察增强溶血现象，常用于 B 群链球菌和部分李斯特菌的辅助鉴别。实际应用中，应严格控制血平板质量、血液来源、培养条件和对照设置，并将溶血表现与其他生化、血清学或分子鉴定结果综合分析。