白色念珠菌检查方法：增菌、分离与确认要点

白色念珠菌（Candida albicans）是一种常见酵母样真菌，可存在于人体皮肤、口腔、阴道和肠道等部位。在药品、化妆品、卫生用品和部分环境样品的微生物检验中，白色念珠菌常作为控制菌或特定微生物检查对象。其检测通常包括增菌培养、分离培养、显色培养基筛选、显微形态观察和芽管试验等步骤。

由于多种念珠菌在普通培养基上的菌落形态相似，仅凭沙氏葡萄糖琼脂上的乳白色酵母样菌落不能直接判定为白色念珠菌。规范检查应通过多个特征组合确认，以减少误判。

一、增菌培养

白色念珠菌检查通常先进行增菌培养。将供试液按规定量接种至适量沙氏葡萄糖肉汤培养基中培养。沙氏葡萄糖肉汤含较高葡萄糖，pH 偏酸，适合酵母菌和霉菌生长，同时对部分细菌有一定抑制作用，因此常用于真菌增菌。

原文中“供试液 10 mL，相当于供试品 1 g、mL、10 cm²”应规范理解为：供试液取样量应与规定的供试品量对应，如 1 g、1 mL 或一定面积样品，经适当处理后接种。实际取样量、培养基体积和培养条件应按相应标准方法执行。

增菌培养的目的，是提高低水平污染白色念珠菌的检出概率，尤其适用于样品中目标菌数量低、存在防腐剂或基质干扰的情况。若样品含有抑菌成分，还应通过方法适用性试验确认供试液处理方式和培养基能有效恢复目标菌。

二、分离培养

增菌后，将培养物划线接种于沙氏葡萄糖琼脂平板上培养，观察是否出现疑似酵母样菌落。白色念珠菌在沙氏葡萄糖琼脂上通常形成乳白色至奶油色菌落，偶可略带淡黄色，表面光滑、湿润、圆形，具有酵母样气味。培养时间延长后，菌落可增大，颜色略加深，质地变厚，表面有时出现皱褶。

若平板无菌落生长，或生长菌落明显不符合酵母样特征，可按方法要求判定未检出白色念珠菌。若出现乳白色、光滑、酵母样菌落，则应进一步确认，不能仅凭外观报告阳性。

三、显色培养基筛选

念珠菌显色培养基常用于白色念珠菌和其他念珠菌的初步区分。白色念珠菌在部分商品化显色培养基上可形成绿色或翠绿色菌落，这是由于其特定酶活性与显色底物反应所致。

若疑似菌在显色培养基上未形成绿色或翠绿色菌落，通常可排除典型白色念珠菌。但显色培养基结果受培养基品牌、培养时间、菌株差异和接种状态影响，不同念珠菌也可能出现相近颜色。因此，绿色菌落只能作为疑似白色念珠菌的重要线索，仍需结合形态学或其他鉴定试验确认。

四、玉米吐温 80 琼脂形态观察

1% 吐温 80 玉米琼脂常用于观察白色念珠菌的假菌丝、芽生孢子和厚膜孢子形成。白色念珠菌在该培养基上可形成假菌丝，并在一定条件下产生厚膜孢子。厚膜孢子通常较大、厚壁，常位于菌丝末端或侧端，是白色念珠菌传统形态鉴定的重要特征之一。

镜检时应观察是否有酵母样细胞、芽生孢子、假菌丝和厚膜孢子。若未见典型酵母样细胞及相关形态结构，应谨慎判读。需要注意，厚膜孢子形成受培养基、温度、培养时间和菌株状态影响，阴性结果不能完全依赖单次观察。

五、芽管试验

芽管试验是白色念珠菌传统快速鉴定方法之一。将疑似菌接种于血清或适宜诱导体系中，在规定温度下短时间孵育后镜检。若可见酵母细胞伸出短小、无明显收缩隔的芽管，则为芽管试验阳性。

白色念珠菌通常芽管试验阳性，但少数近缘种也可能出现类似反应，且操作时间过长可能形成假菌丝，影响判读。因此，芽管应与普通芽生、假菌丝初生结构区分开。典型芽管从母细胞直接伸出，基部无明显缢缩；普通芽生孢子与母细胞连接处常可见缢缩。

六、显微镜与染色检查

白色念珠菌为酵母样真菌，显微镜下可见圆形或卵圆形芽生细胞，可形成假菌丝。革兰染色通常呈革兰阳性或紫色酵母样细胞，但真菌细胞较大，与细菌形态明显不同。

若疑似菌显微镜下不是酵母样形态，或革兰染色不符合真菌特征，且未见假菌丝、厚膜孢子或芽管，应判定未检出白色念珠菌。若镜检结果与培养特征一致，则可进一步结合显色培养基、芽管试验和必要的生化或分子鉴定确认。

七、结果判断逻辑

若增菌和分离培养均未见疑似菌落，可判供试品未检出白色念珠菌。若出现疑似菌落，但显色培养、形态观察和芽管试验均不支持白色念珠菌，也可判为未检出。若多项结果符合白色念珠菌特征，则可判定检出白色念珠菌，必要时再通过生化鉴定、质谱或分子方法确认。

八、培养基在检测中的作用

沙氏葡萄糖肉汤用于增菌，帮助低水平污染的酵母样真菌恢复和增殖；沙氏葡萄糖琼脂用于分离纯化和观察菌落形态；念珠菌显色培养基用于初步区分白色念珠菌与其他念珠菌；玉米吐温 80 琼脂用于诱导和观察典型形态结构。

不同培养基承担不同功能，不能互相替代。若只用沙氏培养基观察菌落，容易将其他酵母菌误判为白色念珠菌；若只用显色培养基，也可能因颜色差异或非典型菌株造成误判。因此，组合检测更可靠。

九、常见误区

第一，乳白色酵母样菌落不等于白色念珠菌。许多酵母菌在沙氏培养基上形态相似。

第二，绿色显色菌落只能作为疑似依据，仍需进一步确认。

第三，芽管试验应控制观察时间。时间过长可能将假菌丝误判为芽管。

第四，未见厚膜孢子不一定完全排除白色念珠菌，应结合培养条件和其他鉴定结果。

第五，样品含防腐剂时必须关注方法适用性，否则可能出现假阴性。

第六，白色念珠菌检查应使用新鲜、纯化的疑似菌落，混合培养物会影响结果判断。

十、小结

白色念珠菌检查通常包括沙氏葡萄糖肉汤增菌、沙氏葡萄糖琼脂分离、念珠菌显色培养基筛选、玉米吐温 80 琼脂形态观察和芽管试验等环节。沙氏培养基可用于真菌恢复和分离，但不能单独完成白色念珠菌确认；显色培养基和芽管试验可提高鉴别效率；厚膜孢子、假菌丝和酵母样细胞观察则是重要形态学依据。实际检测中，应结合培养特征、显色反应、显微形态和必要的鉴定方法综合判断，确保结果准确可靠。