食品微生物学检验：β型溶血性链球菌的检验要点

β型溶血性链球菌是食品微生物检验中的一种致病菌检测对象。它不是一个单一菌种名称，而是以“能够在血琼脂平板上产生β型溶血”为重要表型特征的一类链球菌。GB 4789.11-2014《食品安全国家标准 食品微生物学检验 β型溶血性链球菌检验》规定了食品中β型溶血性链球菌的检验方法，适用于食品中该类微生物的检验。

在食品安全语境下，β型溶血性链球菌的检验意义主要在于发现可能由人员操作、原料污染、加工环境或交叉污染带入的致病性链球菌风险。由于这类菌对营养和培养条件有一定要求，且食品基质中常伴随大量背景菌，因此检测流程通常需要经过增菌、选择性分离、纯培养、形态观察、生化确认等步骤综合判定。

一、什么是β型溶血

血琼脂平板上，某些细菌可产生溶血现象。β型溶血指菌落周围红细胞被完全溶解，形成清晰、透明的溶血环。与α型溶血的绿色或草绿色不完全溶血不同，β型溶血更明显，也更常被用于初步筛选某些致病性链球菌。

需要注意，β型溶血只是筛选线索，不是最终鉴定结论。金黄色葡萄球菌、某些芽胞杆菌、李斯特菌等也可能在血平板上产生溶血现象，因此不能仅凭“有透明圈”就报告为β型溶血性链球菌。

二、β型溶血性链球菌的检验对象

GB 4789.11-2014中所称β型溶血性链球菌，主要包括能够产生β型溶血的化脓链球菌和无乳链球菌。化脓链球菌即 Streptococcus pyogenes，通常对应A群链球菌；无乳链球菌即 Streptococcus agalactiae，通常对应B群链球菌。

旧文中将检验对象写作“Streptococcus”不够准确。Streptococcus 是链球菌属，不等同于β型溶血性链球菌。食品检验报告应按标准要求报告“检出”或“未检出”β型溶血性链球菌，而不是笼统报告“链球菌”。

三、食品中为什么要检验β型溶血性链球菌

β型溶血性链球菌可通过人员、原料、环境或交叉污染进入食品。尤其是即食食品、熟制食品、冷加工食品、含乳食品、糕点、凉拌食品等，若加工后受到污染，又没有后续充分杀菌步骤，就可能带来食品安全风险。

食品中检出β型溶血性链球菌，通常提示以下问题：

因此，该项目不仅是终产品检测，也可作为食品企业卫生管理、人员健康管理和加工过程控制的风险提示。

四、检验流程的基本思路

GB 4789.11-2014的检验流程可概括为：样品处理与增菌、选择性分离、可疑菌落挑取、纯培养、革兰氏染色、触酶试验、辅助生化鉴定和结果报告。正式检测应严格按现行标准和实验室SOP执行，不应仅凭经验替代标准方法。

该流程的核心是“逐步排除干扰菌”。食品样品背景复杂，单一表型反应容易误判，因此必须综合多个证据。

五、培养基的作用：既要恢复，也要筛选

β型溶血性链球菌检验中，培养基体系十分关键。mTSB用于样品增菌，目的是帮助目标菌恢复和增殖；哥伦比亚CNA血琼脂用于选择性分离，CNA成分可抑制部分革兰阴性背景菌，使革兰阳性链球菌类可疑菌更容易被观察；哥伦比亚血琼脂则用于纯培养和观察溶血特征。

对培养基生产企业而言，血琼脂类培养基的质量尤其重要。血液来源、脱纤维状态、琼脂透明度、基础培养基营养、选择剂强度、pH、灭菌受热程度和保存条件，都会影响溶血环表现和目标菌恢复。

六、典型菌落和镜检特征

β型溶血性链球菌在血琼脂类平板上的可疑菌落通常较小，灰白色或半透明，表面光滑，边缘较整齐，并在菌落周围形成透明β型溶血环。显微镜下为革兰氏染色阳性，球形或卵圆形，常呈短链状排列。

但食品样品中的可疑菌落并不总是典型。受培养基、培养条件、菌株状态和背景菌影响，溶血环可能大小不同，菌落也可能不够典型。若只挑取一个菌落，容易漏检；若不做纯培养和确认，又容易误判。

七、触酶试验和辅助鉴定的意义

链球菌通常触酶阴性，而葡萄球菌等常见革兰阳性球菌多为触酶阳性。触酶试验可帮助排除一部分干扰菌。但触酶试验本身也可能受到操作方式、挑取菌落是否带血、试剂状态等影响，因此不能作为唯一判定依据。

链激酶试验在标准中作为选做项目或辅助项目，其意义在于为部分可疑菌确认提供额外信息。但由于不同链球菌种、菌株和检测体系可能存在差异，辅助试验结果应与菌落形态、溶血表现、革兰染色、触酶试验和生化鉴定结果综合判断。

最终确认通常依赖生化鉴定试剂盒、生化鉴定卡或其他经确认的方法。若实验室采用自动化鉴定系统或分子方法作为补充，也应经过方法确认，并符合食品微生物检测质量体系要求。

八、结果报告应谨慎

本项目通常按“每25 g或25 mL检样中检出/未检出β型溶血性链球菌”报告。报告应基于标准流程和确认结果，而不是只根据血琼脂平板上是否有溶血菌落。

微生物检验结果具有样品代表性限制。未检出并不等于整批食品绝对无风险，而是表示在规定检验量和方法条件下未检出目标菌。

九、质量控制要点

β型溶血性链球菌检验的质量控制，应覆盖样品、培养基、设备、人员、菌株、环境和记录。由于该项目涉及血琼脂、选择性分离和生化确认，任何一个环节失控都可能造成假阴性或假阳性。

GB 4789.28-2024已列入食品微生物检验方法标准目录，是培养基和试剂质量要求的重要依据。 对相关培养基生产和使用实验室而言，培养基适用性、无菌性、pH、外观和目标菌表现都应纳入批次质量控制。

十、常见误判与原因分析

β型溶血性链球菌检验中，常见问题包括溶血圈不典型、背景菌过多、目标菌恢复差、触酶试验假阳性、生化鉴定不一致、可疑菌落漏挑或污染导致假阳性。

出现异常时，应先检查培养基批号、质控菌表现、样品前处理、培养条件和确认流程，而不是简单重复一次。

十一、对食品企业的启示

食品中β型溶血性链球菌的检出通常提示卫生控制存在缺陷，尤其应关注人员健康和熟后污染。食品企业应从原料、加工、人员、环境和包装环节排查，而不是只把问题归结为终产品检测不合格。

对即食食品、冷加工食品和熟制后分装产品，人员和环境后污染是重点排查方向。

十二、对培养基企业的启示

β型溶血性链球菌检验对培养基提出了较高要求，尤其是血琼脂类培养基。培养基既要支持链球菌生长，又要使溶血现象清晰可判；选择性培养基还要平衡背景菌抑制与目标菌恢复，不能因选择性过强导致漏检。

对逗点生物这类微生物培养基企业而言，该标准提示我们：血琼脂类产品不能只看“能不能长菌”，还要看溶血反应是否清晰、选择性是否适中、可疑菌落是否易于挑取，以及不同批次是否保持一致。

十三、旧文中的重点修正

十四、小结

β型溶血性链球菌检验是食品致病菌检验体系中的一项重要内容。其核心不是简单观察血平板上有没有透明溶血环，而是通过增菌、选择性分离、纯培养、革兰氏染色、触酶试验和生化鉴定等步骤，综合判断样品中是否存在符合标准定义的目标菌。

在食品企业卫生管理中，β型溶血性链球菌检出常提示人员、环境或熟后加工环节存在污染风险。对培养基研发和生产企业而言，该项目强调血琼脂类培养基的促生长能力、选择性平衡、溶血表现清晰度和批间一致性。只有培养基性能稳定、检验流程规范、确认试验充分，才能保证食品中β型溶血性链球菌检验结果可靠。