食品中单核细胞增生李斯特氏菌（Listeria monocytogenes）的检验方法与临床食品安全意义

一、单核细胞增生李斯特氏菌概述

单核细胞增生李斯特氏菌（Listeria monocytogenes，简称单增李斯特菌）是一种重要的食源性致病菌，属于李斯特菌属（Listeria）。该菌广泛存在于自然环境中，可分布于土壤、水体、植物、动物胃肠道以及食品加工环境中。

与多数食品污染菌不同，单增李斯特菌具有较强的环境适应能力，能够在较低温度（接近冰箱冷藏温度）下缓慢生长，并且具有较强的耐盐能力，因此在冷藏食品、即食食品和加工食品中具有较高风险。

单增李斯特菌感染可导致李斯特菌病（Listeriosis），尤其容易感染：

孕妇；
新生儿；
老年人；
免疫功能低下人群。

严重感染可导致败血症、脑膜炎甚至死亡，因此食品中单增李斯特菌检测一直是食品微生物安全控制的重要项目。

二、单增李斯特菌检验方法概述

食品中单增李斯特菌检测通常包括：

样品处理 → 选择性增菌 → 分离培养 → 初筛 → 生化及特征鉴定 → 结果判定

根据污染程度不同，检测方法通常分为：

定性检测法

用于判断食品中是否存在单增李斯特菌，结果通常报告为：

25 g（mL）样品中检出或未检出单核细胞增生李斯特氏菌。

定量检测法

用于食品中菌数较高情况下的计数，包括平板计数法和MPN法。

对于低污染、高背景菌食品，通常需要经过选择性增菌提高检出能力。

三、单增李斯特菌检测培养基体系

1. 增菌培养基

（1）李氏增菌肉汤（Listeria Enrichment Broth，LB）

李氏增菌肉汤是食品检测中常用的选择性增菌体系，通常包括：

LB1初级增菌液；
LB2二级增菌液。

典型流程：

样品25 g（mL）加入225 mL LB1：

↓

30 ℃培养约24 h

↓

取0.1 mL转入LB2：

↓

30 ℃培养18～24 h

选择性增菌体系通常加入：

盐酸吖啶黄；
萘啶酮酸。

用于抑制部分伴随杂菌，提高单增李斯特菌检出率。

2. 分离培养基

（1）PALCAM琼脂

PALCAM培养基是一种经典李斯特菌选择性分离培养基。

单增李斯特菌典型表现：

小圆形菌落；
灰绿色；
周围出现棕黑色水解圈。

其原理主要依靠：

七叶苷水解产生黑色沉淀；
选择性抑制剂降低杂菌干扰。

（2）ALOA显色培养基

ALOA（Agar Listeria according to Ottaviani and Agosti）是一种李斯特菌显色培养基。

典型单增李斯特菌：

蓝绿色菌落；
周围具有不透明晕圈。

其中：

β-葡萄糖苷酶反应产生显色；
磷脂酶活性形成晕圈。

需要注意：

ALOA上的晕圈并非单增李斯特菌绝对特异性，部分其他李斯特菌（如伊氏李斯特菌）也可能产生类似现象，因此仍需进一步鉴定。

四、单增李斯特菌检验流程

1. 样品增菌

食品样品通常取：

固体食品：25 g；
液体食品：25 mL。

加入：

225 mL LB1增菌液。

均质后：

30 ℃培养24 h左右。

随后转入LB2进行二次增菌。

二级增菌的目的：

提高低水平污染菌检出率；
降低食品基质影响。

2. 分离培养

将增菌液接种于：

ALOA平板；
PALCAM平板；
李斯特菌显色培养基。

培养条件：

30～37 ℃培养24～48 h。

根据典型菌落形态挑取可疑菌落。

五、单增李斯特菌鉴定方法

1. 革兰染色及形态观察

单增李斯特菌特点：

革兰阳性短杆菌；
菌体较小；
无芽胞；
无荚膜。

在显微镜下可观察到：

单个排列；
短链排列；
轻微翻滚运动。

2. 动力试验

李斯特菌具有典型运动能力。

在半固体动力培养基中：

25～30 ℃培养；
呈现典型“伞状”扩散生长。

这是区别李斯特菌的重要特征之一。

需要注意：

部分菌株动力表现可能较弱，因此结果不明显时可延长培养观察。

3. 过氧化氢酶试验

李斯特菌通常：

过氧化氢酶阳性。

加入过氧化氢后产生气泡。

该试验可用于与部分革兰阳性球菌进行初步区别。

4. 糖发酵试验

单增李斯特菌典型特征：

木糖阴性；
鼠李糖阳性。

该组合是初步鉴定的重要依据。

5. 溶血试验

单增李斯特菌通常产生：

狭窄、透明、清晰的β溶血环。

在羊血琼脂上：

溶血范围较窄；
不如伊氏李斯特菌明显。

溶血试验是区分不同李斯特菌的重要指标：

菌种	溶血特点
单核细胞增生李斯特菌	狭窄β溶血
英诺克李斯特菌	无溶血
伊氏李斯特菌	明显宽β溶血
斯氏李斯特菌	弱溶血

6. CAMP协同溶血试验

CAMP试验可辅助鉴别不同李斯特菌。

原理：

利用单增李斯特菌与金黄色葡萄球菌β溶血增强作用。

典型表现：

单增李斯特菌靠近金黄色葡萄球菌处出现溶血增强区域。

该方法目前主要作为传统鉴定辅助方法。

7. 自动化及分子鉴定

现代实验室可采用：

MALDI-TOF质谱；
自动化生化鉴定系统；
PCR检测；
基因测序。

其中PCR检测常针对：

hly基因（编码溶血素）；
prfA基因；
iap基因。

分子方法具有快速、特异性高的特点，适合食品企业和第三方检测实验室应用。

六、单增李斯特菌检测中的质量控制

培养基质量和检测菌株选择直接影响检测结果。

常用质控菌株包括：

菌株	用途
Listeria monocytogenes ATCC19111	阳性控制
Listeria innocua ATCC33090	阴性鉴别
Listeria ivanovii ATCC19119	溶血鉴别
Listeria seeligeri ATCC35967	溶血鉴别
Staphylococcus aureus ATCC25923	CAMP试验辅助
Rhodococcus equi ATCC6939	CAMP试验辅助

质控重点包括：

目标菌良好生长；
非目标菌有效抑制；
显色及生化反应符合预期。

七、食品安全中的应用价值

单增李斯特菌具有：

低温生长能力；
环境耐受性强；
感染后危害严重；

等特点，因此成为食品生产过程中重点控制对象。

重点监控食品包括：

即食肉制品；
乳制品；
水产品；
冷藏食品；
预包装食品。

通过标准化检测流程，可以及时发现食品生产链中的污染风险，降低李斯特菌病发生概率。

八、总结

单核细胞增生李斯特氏菌检测主要依靠选择性增菌、分离培养、形态观察、生化鉴定以及现代分子检测技术相结合的方法。

传统培养方法具有结果可靠、适用范围广的优势，而显色培养基、PCR和质谱技术进一步提高了检测效率。

在实际检测过程中，应注意：

显色培养基只能作为筛选工具，不能替代最终鉴定；
单一生化指标不能完全确定菌种；
应结合溶血、动力、生化及分子方法综合判断。

完善的培养基体系和严格的质量控制，是保证食品中单增李斯特菌检测准确性的关键。逗点生物提供用于李斯特菌检测的增菌培养基、选择性分离培养基及相关微生物检测产品，为食品安全检测提供稳定可靠的实验支持。

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