常见弧菌在不同选择性琼脂平板上的菌落特征

弧菌属细菌广泛存在于海水、河口水体、水产品及相关加工环境中。食品微生物检测中常关注的弧菌包括副溶血性弧菌、创伤弧菌、霍乱弧菌、溶藻弧菌和河弧菌等。它们部分具有食源性致病风险，尤其在水产品、即食海产品、生食或半生食食品中具有重要卫生学意义。

在实验室检验中，选择性琼脂平板常用于弧菌的分离和初筛。不同弧菌在 TCBS、mCPC、4号琼脂和弧菌显色培养基上可表现出不同菌落颜色和形态。但需要强调：**菌落特征只能提示“可疑弧菌”，不能直接完成菌种确认。**最终结果仍需结合氧化酶试验、盐耐受性、生化鉴定、血清学、质谱或分子方法等进行综合判定。

一、弧菌选择性培养基的作用

弧菌选择性培养基的核心作用是抑制部分杂菌，同时利用弧菌对盐、胆盐、蔗糖或特定底物的利用差异，帮助形成具有提示意义的菌落特征。

常见培养基包括：

TCBS 是最常用的弧菌选择性培养基之一。副溶血性弧菌和创伤弧菌多不发酵蔗糖，通常呈绿色或蓝绿色菌落；霍乱弧菌、溶藻弧菌、河弧菌常可发酵蔗糖，通常呈黄色菌落。但这种规律并非绝对，仍需后续确认。

二、常见弧菌在选择性平板上的典型菌落特征

根据原始资料整理，常见弧菌在不同选择性琼脂平板上的表现可概括如下：

注：NG 表示不生长或生长很差。上述特征用于初筛，不应用于单独确证。

三、TCBS 平板如何判读

TCBS 琼脂是弧菌检测中应用最广泛的选择性培养基。其选择性主要来自较高 pH、胆盐和盐分环境，鉴别性则常与蔗糖发酵及 pH 指示系统有关。

在 TCBS 上，黄色菌落通常提示蔗糖发酵阳性，绿色菌落通常提示蔗糖不发酵或发酵不明显。因此，霍乱弧菌、溶藻弧菌、河弧菌常表现为黄色菌落，而副溶血性弧菌和创伤弧菌常表现为绿色菌落。

但实际判读时应注意三点：

第一，颜色不是绝对标准。同一种弧菌在不同培养基批次、不同培养时间或不同菌株间可能出现颜色深浅差异。

第二，TCBS 上黄色菌落并不等于霍乱弧菌。溶藻弧菌、河弧菌及其他蔗糖发酵菌也可能形成黄色菌落。

第三，绿色菌落也不等于副溶血性弧菌。创伤弧菌及其他非蔗糖发酵弧菌也可能呈绿色菌落。

GB 4789.7—2013 规定了食品中副溶血性弧菌的检验方法，TCBS 等选择性分离步骤只是检验流程中的一环，后续仍需进行确认试验。

四、mCPC 平板的应用特点

mCPC 琼脂常用于创伤弧菌等目标菌的选择性分离。原文中创伤弧菌在 mCPC 上表现为圆形、扁平、中心不透明、边缘透明的黄色菌落，这一特征对初筛有参考价值。

霍乱弧菌在 mCPC 上可能形成紫色菌落，但 mCPC 并不是所有弧菌通用的最佳分离平板。副溶血性弧菌、溶藻弧菌、河弧菌在该培养基上可表现为不生长或生长很差。

mCPC 的选择性较强，若目标菌受损、样品中菌量低或培养基选择性偏强，可能出现回收不足。因此，在实际检测中应结合标准方法、增菌体系和目标菌确认步骤使用。

五、4号琼脂的判读意义

4号琼脂常用于霍乱弧菌的选择性分离和观察。原文中霍乱弧菌在 4号琼脂上表现为圆形、半透明、表面光滑的无色菌落，菌落中心常呈灰色或灰黑色，随培养时间延长颜色加深。这一特征可作为霍乱弧菌初筛线索。

但 4号琼脂也不能单独用于确证。霍乱弧菌的确认通常需要结合菌落形态、氧化酶反应、生化特征、血清学分群和必要的分子检测等。出口食品中霍乱弧菌检验也有对应行业标准方法，提示该类目标菌检测应按专门标准流程执行。

六、弧菌显色培养基的使用注意

弧菌显色培养基可通过特定底物反应使目标弧菌形成不同颜色菌落，便于快速初筛。相较传统 TCBS，显色培养基在部分目标菌筛选中更直观，尤其对副溶血性弧菌、创伤弧菌、霍乱弧菌和溶藻弧菌等可提供辅助区分。

但原文提示“河弧菌必须使用 TCBS，显色培养基效果不佳”，这一点在实际应用中具有参考意义。显色培养基的识别能力依赖底物设计和菌株酶活性，不同厂家产品差异较大；某些目标菌或环境菌可能出现颜色不典型、弱显色或假阳性。

因此，使用显色培养基时应注意：

七、典型菌落挑取原则

选择性平板上出现典型或可疑菌落后，应挑取多个菌落进行后续试验。原文建议每种菌从选择性琼脂平板上挑取 3～5 个典型或可疑菌落，这是合理的初筛思路。

原因在于食品、水产品和环境样品中常存在混合菌群，同一平板上可能同时出现目标菌、近缘弧菌和非目标干扰菌。若只挑取一个菌落，容易漏检目标菌或误选干扰菌。

建议挑取时遵循以下原则：

挑取后应进行纯化培养，再开展后续鉴定。直接从混合平板上做生化或仪器鉴定，容易出现结果混乱。

八、不同弧菌的食品安全关注点

不同弧菌的风险背景不同，检测目的也不同。

在食品检验中，弧菌检测不能只看“是否有绿色或黄色菌落”，还应结合样品类型。例如海产品中弧菌背景菌较复杂，TCBS 上出现大量黄色菌落或绿色菌落并不罕见，必须通过后续确认判断目标菌。

九、结果判读中的常见误区

第一，把 TCBS 黄色菌落直接判为霍乱弧菌。溶藻弧菌、河弧菌等也可能形成黄色菌落。

第二，把 TCBS 绿色菌落直接判为副溶血性弧菌。创伤弧菌等也可能呈绿色菌落。

第三，认为 NG 表示所有菌株绝对不生长。NG 更准确理解为在该培养基上不生长或生长很差，实际表现受菌株和条件影响。

第四，只挑一个典型菌落做确认。混合菌群样品中应挑取多个典型和可疑菌落。

第五，显色培养基颜色越鲜艳越可靠。显色反应受底物、菌株和培养条件影响，仍需确证。

第六，忽视培养基质控。选择性培养基过强可能抑制目标菌，过弱则会导致干扰菌过多。

第七，仅凭菌落形态出具结论。弧菌属内近缘种较多，需结合生化、血清学或分子方法确认。

十、培养基质量控制要点

弧菌选择性培养基应进行批次质量控制，包括外观、pH、凝胶强度、无菌性、促生长能力、选择性和典型反应。尤其是 TCBS、mCPC、显色培养基等选择性或鉴别性培养基，其性能会直接影响目标菌检出。

对于显色培养基，还应使用目标菌和干扰菌进行对照，确认颜色反应和抑制能力符合预期。

十一、小结

常见弧菌在 TCBS、mCPC、4号琼脂和弧菌显色培养基上可表现出不同菌落特征。副溶血性弧菌和创伤弧菌在 TCBS 上常呈绿色菌落；霍乱弧菌、溶藻弧菌和河弧菌在 TCBS 上常呈黄色菌落；创伤弧菌在 mCPC 上可形成黄色特征菌落；霍乱弧菌在 4号琼脂上可出现无色、中心灰黑色加深的菌落。上述特征有助于快速筛选可疑菌落，但不能替代确证试验。实际检测中，应根据标准方法选择培养基，挑取多个典型或可疑菌落，结合纯化、生化、血清学、质谱或分子检测结果综合判定。