婴幼儿乳粉中蜡样芽孢杆菌呕吐毒素的测定（逗点生物 Copure® HLB固相萃取小柱 )
- 2026-07-09 14:32:30
- 逗点生物
婴幼儿乳粉中蜡样芽孢杆菌呕吐毒素的测定
一、标准溶液的配制
（1）蜡样芽胞杆菌呕吐毒素标准工作液（0. 1 mg/L）：准确吸取标准中间液（1.0
mg/L）1.0 mL ，用乙腈溶液稀释成 0. 1 mg/L 的标准工作液。
（2） 蜡样芽胞杆菌呕吐毒素内标标准工作液（0. 1 mg/L）：准确吸取内标标准中间溶液（1.0
mg/L）1.0 mL， 并用乙腈溶液稀释成 0. 1 mg/L 的内标标准工作液。
（3） 标准系列工作溶液：准确吸取 0. 1 mg/L 的标准工作液，10 μL 、50 μL、100 μL、200 μL、500 μL、1 000 μL 分别置于 10.0 mL 容量瓶中，加入 200 μL 0. 1 mg/L 的内标标准工作液，用初始流动相制成浓度分别为 0. 1 μg/L、0.5 μg/L、1.0 μg/L、2.0 μg/L、5.0 μg/L、10.0 μg/L 的标准系列溶液，含内标浓度为 2.0 μg/L。
二、样品前处理
2.1 样品提取
称取1 g（精确至0.01 g）均匀试样置于15 mL离心管，加入内标标准工作液（0. 1 mg/L） 20 µL，静置30 min后，准确加入5.0 mL乙腈，涡旋混均30 s，超声30 min。4 ℃下12
000 r/min离心10 min 。 转移全部上清液至15 mL离心管中，加入5.0 mL水，涡旋混合30 s ，待HLB-P 柱净化。
2.2样品净化（Copure® HLB-P 200mg/6mL）
活化 3mL甲醇、3mL纯水依次活化小柱，弃去流出液；
上样 取全部待净化液过柱，弃去流出液；
淋洗 3mL纯水淋洗小柱，弃去流出液；
洗脱 5mL 甲醇洗脱，收集洗脱液。
氮吹复溶：洗脱液于40℃氮吹至近干，加入1.0mL初始流动项复溶，涡旋混匀，过亲水PTFE滤膜，供LC-MS/MS测定。
三、仪器条件
仪器：AB SCIEX 5500三重四级杆 液质联用仪
色谱柱：Waters BEH C18，50 mm ×2.1 mm,1.7um )
流动相：A：0.1%甲酸-2.0mmol/L 乙酸铵水溶液；B：0.1%甲酸乙腈
洗脱方式：梯度洗脱，洗脱程序见表1
流速：0.4 mL/min
柱温：40℃，进样量：10μL
质谱条件
离子源：ESI正模式
离子源参数：
气帘气（CUR）：30 psi ； 碰撞气（CAD）：9 (Medium)
离子源温度（TEM）：450 ℃ ； 离子喷雾电压 (IS)：5500 V
雾化气（Gas1）：55 psi ； 辅助加热气 （Gas2）：55 psi
定性、定量离子对见表2
表1 梯度洗脱程序
时间/min |
流速mL/min |
流动相A% |
流动相B% |
0.0 |
0.4 |
10 |
90 |
3.0 |
0.4 |
0 |
100 |
6.0 |
0.4 |
0 |
100 |
6.1 |
0.4 |
0 |
100 |
8.0 |
0.4 |
10 |
90 |
表2 蜡样芽胞杆菌呕吐毒素监测参数
化合物 |
母离子(m/z) |
子离子(m/z) |
参考碰撞能量(eV) |
蜡样芽胞杆菌呕吐毒素 |
1170.7 |
1125.7 |
54 |
1170.7 |
741.5 |
65 |
|
1170.7 |
357 |
76 |
|
13C6-蜡样芽胞杆菌呕吐毒素 |
1176.7 |
1130.7 |
54 |
四、实验结果
4.1实验结果
表3 乳粉中蜡样芽胞杆菌呕吐毒素的添加回收结果
项目 |
婴幼儿乳粉 |
||||||
本底 |
添加浓度：0.5μg/kg |
||||||
测定值（μg/L) |
测定值（μg/kg) |
测定值（μg/L) |
测定值（μg/kg) |
回收率% |
平均回收率% |
相对相差% |
|
蜡样芽胞杆菌呕吐毒素 |
ND |
ND |
0.5354 |
0.535 |
107 |
106 |
1.89 |
ND |
0.5241 |
0.524 |
105 |
||||
4.2实验谱图
图1 曲线浓度点为0.5ng/mL的蜡样芽胞杆菌呕吐毒素色谱图
