培养基的质量控制：从文件验收到性能测试

培养基是微生物检验的基础。无论是食品菌落总数、控制菌检查、药品无菌检查、环境监测，还是培养基研发质控，培养基性能都会直接影响结果。培养基如果营养不足、选择性过强、pH 偏差、灭菌过度、添加剂失效或被污染，都会导致假阴性、假阳性、计数偏低、典型反应不清或批间结果不稳定。

培养基质量控制不是只看“是否长菌”，而是覆盖采购、文件审核、交付验收、贮存、制备、灭菌、分装、使用、性能测试、记录追溯和异常调查的全过程。GB 4789.28—2024 已对食品微生物检验培养基和试剂的质量要求作出规定；ISO 11133 也明确覆盖培养基质量保证相关术语、制备要求和性能测试要求。

一、培养基质量控制为什么重要

培养基的作用不只是提供营养。不同培养基还可能承担复苏、选择、鉴别、计数、富集、抑制背景菌、显示典型反应等功能。一个培养基是否合格，需要同时满足物理化学指标和微生物性能指标。

对培养基企业和使用实验室来说，质量控制的目标是保证培养基在有效期内持续符合预期用途，而不是只在出厂或配制当天合格。

二、证明文件：先确认“来源可靠”

培养基、添加剂和独立成分到货后，首先应审查供应商文件。文件审查可以帮助实验室判断产品是否符合采购要求，也为后续偏差调查和结果追溯提供依据。

供应商通常应提供以下信息：

对含抗生素、胆盐、染料、显色底物、亚碲酸盐、选择剂或其他特殊添加剂的培养基，更应关注安全数据和储存条件。添加剂失效往往不会从外观上立即看出，但会直接影响选择性和指示性。

三、交付验收：到货检查不能省略

每一批脱水培养基、即用型培养基、平板、试剂和添加剂到货后，应进行交付验收。验收不合格的产品不应直接入库使用。

重点检查内容包括：

实验室应记录接收日期、验收人、验收结论和异常处理。若发现破包、受潮、冷链异常、有效期不足或文件缺失，应隔离并评估，不宜直接放入合格库存。

四、贮存：按说明书，也要按验证结果

培养基应按供应商说明书、标准要求和实验室验证结果保存。脱水培养基通常应密闭、避光、干燥保存；某些添加剂需要冷藏、冷冻或避光保存；商品化平板则常需在规定温度下保存并避免冻融和过度失水。

对脱水培养基，应建立库存清单和开封管理：

若脱水培养基出现明显结块、吸潮、颜色异常、气味异常或流动性明显变差，应停止使用并评估报废。不要试图通过延长溶解时间或加大加热强度“挽救”受潮培养基。

五、实验室制备培养基：记录要能追溯

实验室自制培养基时，应严格按标准、药典、说明书或经验证配方制备。使用商品化脱水培养基时，也应记录称量量、配制体积、pH、灭菌条件、制备日期、制备人和批号。若使用单独成分配制，更要记录每种原料的名称、级别、供应商、批号和用量。

关键记录包括：

培养基配制记录应能支持问题追溯。例如当某批样品菌落数偏低时，应能回查培养基配制、灭菌、pH、添加剂和性能测试情况。

六、水质：容易被忽略的原料

培养基制备用水会影响 pH、凝胶强度、沉淀、颜色和促生长能力。原文提到实验室用水 25℃电导率不高于 25 μS/cm，微生物污染不超过 10³ CFU/mL、最好低于 10² CFU/mL，这类要求体现了培养基制备用水应受控的原则。

水质异常可能带来以下问题：

培养基生产和实验室配制都应将水作为关键原料管理，而不是默认“纯化水一定适合所有培养基”。

七、称量、复水和溶解：避免结块与过热

脱水培养基称量时应防止吸入粉尘，尤其是含胆盐、染料、抗生素或其他刺激性成分的培养基。称量后应先用部分水充分分散，再补足体积，避免形成难以溶解的团块。

含琼脂培养基在加热前可适当浸泡，有助于琼脂吸水膨胀和均匀溶解。加热时应持续搅拌，避免局部过热、焦化或瓶底结块。过度加热会导致糖类分解、颜色加深、pH 改变、选择剂失活和促生长能力下降。

常见错误包括：

八、pH 控制：测量温度和校准同样重要

pH 是培养基质量控制中的核心指标。多数培养基要求在灭菌后、冷却至规定温度时测定 pH。原文中提到，除特殊说明外，培养基灭菌后冷却至 25℃时 pH 变化通常不应超过规定范围，这一原则是为了保证不同批次培养基的生长性能和选择性一致。

pH 异常常见原因包括：

商品化脱水培养基通常已按配方设计，若使用符合要求的水配制，一般不应随意在灭菌前大幅调 pH，除非说明书或标准要求。随意调节可能破坏培养基体系。

九、灭菌：不是所有培养基都适合 121℃ 15 分钟

培养基灭菌通常采用湿热灭菌或过滤除菌，但并非所有培养基都适合相同灭菌条件。部分含热敏染料、选择剂、抗生素或显色底物的培养基不能高压灭菌，可能要求煮沸、过滤添加或低温处理。

湿热灭菌时，常见基础条件为 121℃附近一定时间，但大容量培养基需要特别谨慎。体积超过 1000 mL 时，升温和降温过程延长，可能造成过度加热；若灭菌时间不足，又可能灭菌不彻底。因此，大容量培养基应通过灭菌程序验证或按设备说明调整。

过滤除菌常用于热敏添加剂，如抗生素、维生素、血清、某些显色底物和选择性补充剂。过滤时应使用适宜孔径的无菌滤膜和经灭菌的过滤装置，并关注滤膜对蛋白质、抗生素或疏水性物质的吸附。

十、添加剂：温度、浓度和稳定性决定成败

很多选择性培养基依赖添加剂才能发挥作用，例如抗生素、胆盐、染料、亚碲酸盐、卵黄、血液、显色底物和中和剂。添加剂管理不当，会直接造成选择性差、目标菌生长差或典型反应缺失。

添加剂使用要点：

抗生素工作液通常不宜长期反复冻融。解冻后再次冷冻可能导致活性下降或污染风险增加，应按说明书或验证结果管理。

十一、琼脂培养基使用：融化后不要无限期保温

已灭菌凝固的琼脂培养基使用前需要融化。融化时应尽量缩短加热时间，完全融化后及时移出热源，并在适宜温度下保温使用。倾注法中，培养基温度过高可能损伤样品中的微生物；温度过低则可能提前凝固、形成片状物或分布不均。

原文提到融化后培养基通常放入 47℃～50℃水浴保温，并尽快使用；加入样品的培养基温度应按相关标准控制。该原则的重点是避免热损伤、过度干燥和反复融化。

剩余培养基凝固后通常不应再次融化使用，尤其是含选择剂、指示剂、糖类或显色底物的敏感培养基。反复加热会导致性能下降。

十二、平板制备和储存：厚度、水分和冷凝水都要控制

平板厚度会影响菌落大小、扩散、选择性和培养期间水分损失。90 mm 平皿通常加入约 18～20 mL 琼脂培养基可形成适宜厚度，具体应按标准或企业 SOP 执行。若培养时间长、培养温度高或培养箱风速较大，可适当增加倾注量以减少失水影响。

平板储存应注意：

平板过湿会造成菌液流动、菌落融合和选择性下降；过干则可能抑制受损菌恢复，使菌落变小甚至不生长。

十三、性能测试：培养基放行的核心

培养基最终质量应通过物理质量控制和微生物性能测试确认。性能测试不是形式化地“接一株菌看能否生长”，而是要证明培养基符合其预期用途。

微生物性能测试通常包括：

ISO 11133 明确规定了培养基制备、生产、贮存和性能测试要求，并适用于食品、饲料、水及食品生产环境样品微生物分析用培养基；GB 4789.28—2024 则是我国食品微生物检验培养基和试剂质量控制的重要依据。

十四、测试菌株如何选择

用于培养基质控的菌株应能证明培养基性能。不是所有培养基都只用一株阳性菌即可。选择性或鉴别培养基应同时设置强阳性、弱阳性、阴性反应菌和抑制菌株，以证明促生长、选择性和指示性均符合要求。

标准菌株应来自可追溯保藏机构，并进行代次管理、纯度确认和特性确认。新复苏菌株可能存在短期非典型反应，使用前应确认其状态。

十五、即用型培养基也要做接收和使用确认

商品化即用型培养基由专业厂家生产，通常附有质量证书。若供应商质量体系完善，使用者不一定需要重复进行大量全项目测试，但仍应进行到货验收、贮存条件确认和必要的使用前检查。

即用型平板至少应关注：

药品微生物检验中，培养基适用性检查仍应按现行《中国药典》相关通则和企业 SOP 执行。2025 年版《中国药典》已自 2025 年 10 月 1 日实施，企业应依据新版药典完成标准适用性评估。

十六、异常现象与原因分析

培养基异常应从原料、水、配制、灭菌、添加剂、容器、保存和使用全过程排查。

异常批次不应简单报废了事。若该批培养基已用于样品检测，应评估对历史检测结果的影响，必要时启动偏差调查。

十七、培养基质量控制记录

完整记录是培养基质量体系的重要组成部分。建议至少保存以下记录：

对于培养基生产企业，还应建立批生产记录、批检验记录、稳定性数据、留样观察、供应商管理和客户投诉调查体系。

十八、常见误区

第一，认为培养基能长菌就是合格。培养基还必须符合选择性、指示性、pH、无菌性和稳定性要求。

第二，认为供应商有 COA 就不用验收。COA 不能替代到货包装、运输条件和外观检查。

第三，认为脱水培养基开封后可一直用到标签有效期。开封后吸湿和氧化风险增加，应控制开封后使用期。

第四，认为 121℃ 15 分钟适合所有培养基。热敏培养基、含糖培养基和大容量培养基需按标准或验证条件处理。

第五，认为抗生素添加剂可以反复冻融。反复冻融可能降低活性并增加污染风险。

第六，认为平板越干越好。过度干燥会影响受损菌恢复和菌落形态。

第七，认为选择性越强越好。选择性过强会抑制目标菌，尤其是受损目标菌。

第八，认为即用型培养基无需任何检查。即用型培养基仍需接收、储存和必要性能确认。

十九、小结

培养基质量控制是一套覆盖全生命周期的管理体系。合格培养基应做到：来源和文件可追溯，到货验收合格，贮存条件受控，制备过程记录完整，水质、pH、灭菌、添加剂和分装过程符合要求，使用前外观正常，最终性能测试能够证明促生长、选择性、指示性和无菌性满足预期用途。对食品微生物实验室，应结合 GB 4789.28—2024 和 ISO 11133 的思路建立培养基性能测试体系；对药品微生物实验室，则应结合 2025 年版《中国药典》相关通则进行培养基适用性检查。培养基不是普通耗材，而是微生物检验结果可靠性的核心基础。