副溶血性弧菌的生物学特性及检测方法简介

副溶血性弧菌（Vibrio parahaemolyticus）是一种重要的海洋源性食源性致病菌，主要存在于近海海水、海产品以及盐渍食品中。由于其具有较强的嗜盐特性，在海洋环境中具有良好的适应能力。当摄入被大量副溶血性弧菌污染的食品后，可引起急性胃肠炎，表现为腹痛、腹泻、恶心、呕吐等症状，是我国沿海地区夏秋季节食源性疾病的重要病原菌之一。

一、副溶血性弧菌的形态及培养特征

副溶血性弧菌属于弧菌科（Vibrionaceae），为革兰氏阴性、无芽孢、无荚膜的多形态杆菌或弯曲杆菌。菌体大小约为（0.5～0.8）μm ×（1.4～2.6）μm，在显微镜下可观察到杆状、弧状或卵圆状等不同形态。

该菌具有运动性，通常具有极生单鞭毛，在液体培养条件下表现明显；在部分固体培养条件下，也可能形成侧生或周生鞭毛结构。副溶血性弧菌具有明显的嗜盐性，无盐环境下一般不能正常生长，适宜氯化钠浓度约为2%～3%（20～30 g/L），部分菌株可耐受更高盐浓度。

副溶血性弧菌的最适生长温度约为37℃，最适pH范围为7.7～8.0，属于偏碱性环境适应菌。在适宜培养条件下，菌体生长速度较快，因此食品检测过程中需要注意样品保存温度和检测时效，避免菌量发生明显变化。

在普通培养条件下，副溶血性弧菌菌落通常表现为圆形、光滑、湿润、边缘整齐、半透明或灰白色菌落，培养时间一般为18～24 h。

二、副溶血性弧菌的主要检测培养基特征

1. 3%氯化钠胰蛋白胨大豆琼脂（3% NaCl TSA）

由于副溶血性弧菌具有嗜盐特性，普通培养基中加入适量氯化钠能够提高其生长性能。

在含3%氯化钠的胰蛋白胨大豆琼脂培养基（TSA）上，36℃±1℃培养18 h后，可观察到菌体呈现典型弧菌形态：

• 革兰氏阴性；

• 无芽孢；

• 无荚膜；

• 菌体呈杆状、弧状或卵球状；

• 具有运动性。

该培养基主要用于菌株复苏、纯培养和基础生理特征观察。

2. TCBS琼脂培养基

TCBS（Thiosulfate Citrate Bile Salts Sucrose Agar，硫代硫酸盐-柠檬酸盐-胆盐-蔗糖琼脂）是弧菌分离培养中常用的选择性培养基。

副溶血性弧菌在TCBS培养基上通常表现为：

• 36℃±1℃培养18～24 h；

• 菌落呈蓝绿色或蓝绿色圆形菌落；

• 菌落表面光滑、湿润；

• 一般不发酵蔗糖，因此不会形成黄色菌落；

• 硫化氢反应阴性。

由于TCBS对多数肠道菌具有较强抑制作用，因此适用于从食品、海产品和环境样品中分离弧菌。

3. 弧菌显色培养基

弧菌显色培养基利用目标菌特异性酶活性与显色底物反应，实现快速鉴别。

副溶血性弧菌在弧菌显色培养基上通常表现为：

• 36℃±1℃培养约24 h；

• 菌落呈蓝绿色；

• 菌落圆形、边缘整齐；

• 表面光滑。

需要注意的是，显色培养基结果属于初筛结果，最终确认仍需结合生化试验或分子检测。

三、副溶血性弧菌的主要生化特征

1. 嗜盐性试验

嗜盐性是副溶血性弧菌的重要鉴别特征之一。

典型结果：

需要注意，不同菌株的耐盐能力存在差异，因此实际检测应结合标准方法要求进行判断。

2. 三糖铁琼脂（TSI）反应

副溶血性弧菌在含3%氯化钠的三糖铁琼脂上通常表现为：

• 斜面产碱，呈红色；

• 底层产酸，呈黄色；

• 不产生硫化氢；

• 一般不产气。

该反应有助于与部分肠杆菌科细菌进行区分。

四、神奈川现象与致病性判断

副溶血性弧菌的致病性与其产生耐热直接溶血素（TDH）和相关溶血素（TRH）的能力有关。其中，神奈川现象（Kanagawa phenomenon，KP）是传统用于评价副溶血性弧菌致病性的经典指标。

在含高盐甘露醇的我妻氏琼脂（Wagatsuma agar）培养基上，能够产生TDH的菌株可出现明显β溶血环，即菌落周围出现透明溶血圈。

但需要注意，神奈川现象并不能完全代表菌株的实际致病能力。部分临床相关菌株可能表现为阴性，而部分环境菌株也可能携带相关毒力基因。因此，目前副溶血性弧菌致病性评价通常结合：

• tdh基因检测；

• trh基因检测；

• 血清分型；

• 生化特征；

• 流行病学资料

进行综合判断。

五、副溶血性弧菌检测中的关键注意事项

1. 培养基盐浓度必须满足要求

副溶血性弧菌对盐浓度较敏感，普通培养基可能导致生长不良，因此分离培养基和基础培养基通常需要添加氯化钠。

1. 避免低温长时间保存导致菌量变化

副溶血性弧菌适宜温度较高，样品运输和保存过程中应严格控制条件，防止菌量降低影响检出。

1. 显色培养基不能替代确认试验

显色培养基能够提高筛查效率，但部分非目标菌可能产生类似颜色，因此阳性结果通常需要结合生化或分子方法确认。

1. 注意菌株差异

不同来源的副溶血性弧菌在耐盐性、溶血性、生化反应等方面可能存在差异，实验结果应结合标准要求综合分析。

六、小结

副溶血性弧菌是一种典型的嗜盐性海洋病原菌，也是食品微生物检测中的重点控制对象。其检测主要依据其嗜盐特性、选择培养特征、生化反应以及毒力相关指标进行综合判断。

在实验室检测中，TCBS培养基、弧菌显色培养基、3%氯化钠培养基以及血液相关鉴别培养基均发挥重要作用。理解副溶血性弧菌的生物学特点和培养特征，有助于提高食品、海产品及环境样品中该菌检测的准确性和可靠性。