实验室用水小常识:蒸馏水、去离子水、反渗透水与超纯水
- 2026-07-24 16:38:49
- 逗点生物
实验室用水小常识:蒸馏水、去离子水、反渗透水与超纯水
实验室用水是试剂配制、培养基制备、仪器分析、清洗和微生物检测中最基础、使用量最大的材料之一。水质看似普通,却会直接影响pH、电导率、培养基澄清度、沉淀、显色反应、微生物生长和检测结果。对于微生物培养基而言,水中的离子、有机物、微生物、内毒素、余氯、重金属或清洗剂残留,都可能成为隐性干扰因素。
实验室常见用水包括蒸馏水、去离子水、反渗透水和超纯水。它们的制备方式不同,适用场景也不同。选择实验室用水时,不应只看名称,而应关注电导率、电阻率、总有机碳、微生物负载、颗粒、内毒素和储存方式等指标。
一、蒸馏水
蒸馏水是通过加热使水汽化,再冷凝收集得到的水。蒸馏过程可去除大部分不挥发性盐类、颗粒和部分微生物,因此早期实验室使用较广。
但蒸馏水并不能去除所有杂质。部分挥发性物质,如氨、二氧化碳、挥发性有机物等,可能随水蒸气进入冷凝水。原文中将“二氧化硅”列为挥发性杂质不准确,二氧化硅本身不易挥发,但在蒸馏设备中可能因雾沫夹带、设备污染或玻璃溶出等原因进入水中。
| 项目 | 蒸馏水特点 |
|---|---|
| 制备原理 | 加热蒸发后冷凝 |
| 可去除 | 多数无机盐、颗粒、部分微生物 |
| 不足 | 能耗高,制水慢,可能带入挥发性杂质 |
| 适用场景 | 普通试剂配制、一般清洗、部分培养基制备 |
| 注意事项 | 不宜长时间储存,储水容器需洁净、惰性、密闭 |
新鲜蒸馏水微生物负载通常较低,但不能简单等同于无菌水。若用于无菌试验、注射用水相关试验或无菌培养基添加,仍需按要求灭菌或使用符合标准的无菌水。
二、去离子水
去离子水是通过离子交换树脂去除水中阳离子和阴离子得到的水。其主要特点是离子含量低、电导率低,适合多数常规试剂配制和实验室清洗。
去离子水的不足是:它主要去除离子,对非离子型有机物、颗粒、微生物和内毒素的去除能力有限。离子交换树脂使用时间过长或维护不当时,还可能滋生微生物,释放有机物或导致水质波动。
| 项目 | 去离子水特点 |
|---|---|
| 制备原理 | 离子交换树脂去除阴阳离子 |
| 可去除 | 多数可交换离子 |
| 不足 | 对有机物、微生物、内毒素和颗粒控制有限 |
| 适用场景 | 普通试剂、缓冲液、清洗用水 |
| 注意事项 | 树脂需定期再生或更换,取水后不宜久存 |
去离子水若长期储存在开放容器中,容易吸收空气中的二氧化碳,导致电导率升高、pH下降;也容易发生微生物污染。因此,应尽量现取现用。
三、反渗透水
反渗透水是通过压力使水分子透过反渗透膜,而将大部分溶解盐、颗粒、胶体、微生物和部分有机物截留在浓水侧得到的水。反渗透系统制水速度较快、能耗较低,是现代实验室和生产用水系统中常见的预处理或基础纯化方式。
反渗透膜对盐类有较高去除率,优质膜元件的脱盐率可接近或达到约99%,但实际水质受原水质量、膜材料、压力、温度、回收率、膜污染、预处理和维护状态影响。
| 项目 | 反渗透水特点 |
|---|---|
| 制备原理 | 压力驱动水分子通过半透膜 |
| 可去除 | 大部分盐类、颗粒、胶体、细菌和部分有机物 |
| 不足 | 不能保证完全去除所有微生物、内毒素和小分子有机物 |
| 适用场景 | 实验室纯水系统前级用水、普通培养基制备用水 |
| 注意事项 | 需定期维护膜、管路和储水箱,防止生物膜污染 |
反渗透水纯度较高,但也容易在储水箱和管路中发生二次污染。水箱、循环管路、终端过滤器和取水口应定期清洗消毒,并监测电导率和微生物指标。
四、超纯水
超纯水是经过多级纯化后获得的高纯度水,常用于高灵敏度分析、分子生物学、细胞培养相关实验和精密仪器检测。常见超纯水系统通常包括反渗透、离子交换、活性炭、紫外氧化、超滤和终端过滤等模块。
超纯水的重要指标之一是电阻率。理论上,25℃时高纯水的电阻率约为18.2 MΩ·cm,这接近实验室超纯水的最高水平。原文中“18.25 MΩ·cm”不宜作为标准值,更常用表述为18.2 MΩ·cm。电阻率单位应写作MΩ·cm,而不是MΩ/cm。
| 项目 | 超纯水特点 |
|---|---|
| 典型电阻率 | 约18.2 MΩ·cm(25℃) |
| 主要指标 | 电阻率、TOC、微生物、颗粒、内毒素、核酸酶等 |
| 优点 | 离子和有机物水平极低,可满足高灵敏实验 |
| 不足 | 极易被空气、容器和管路二次污染 |
| 使用原则 | 现取现用,不建议普通容器长时间储存 |
原文称“超纯水是一种强氧化剂”是错误的。超纯水本身不是强氧化剂。由于离子含量极低,它对空气中的二氧化碳、容器析出物和环境污染物非常敏感,表现为电阻率容易下降,但这不是因为它具有强氧化性。
五、实验室用水常见质量指标
不同实验对水质要求不同,不能只用“纯不纯”描述。常见评价指标包括电导率或电阻率、总有机碳、微生物、内毒素、颗粒、pH和特定离子含量等。
| 指标 | 含义 | 主要影响 |
|---|---|---|
| 电导率 | 反映水中离子导电能力 | 离子越多,电导率越高 |
| 电阻率 | 电导率的倒数,用于评价高纯水 | 电阻率越高,离子越少 |
| TOC | 总有机碳,反映有机物污染水平 | 影响色谱、细胞培养、微生物背景 |
| 微生物 | 水中活菌数量 | 影响培养基、试剂和检测空白 |
| 内毒素 | 革兰阴性菌脂多糖相关热原物质 | 影响细胞实验、药品和生物制品相关检测 |
| 颗粒 | 水中不溶性微粒 | 影响仪器、过滤和洁净度 |
| pH | 水的酸碱度 | 高纯水pH易漂移,测定意义需谨慎解释 |
内毒素单位通常用EU/mL表示,不能写作CFU/EU。CFU用于表示可培养微生物数量,EU用于表示内毒素活性,两者不是同一概念。
六、储存容器和二次污染
实验室用水在制备后容易受到容器、空气、管路和取水操作污染。原文中“应选择非惰性材料容器”表述相反,应修正为:储水容器应尽量选择洁净、低析出、化学惰性较好的材料,如合适等级的硼硅玻璃、聚乙烯、聚丙烯或专用储水容器。具体材料应根据水质等级和用途选择。
储存时应注意:
容器应清洁、密闭,避免灰尘和空气微生物进入;
不同等级用水应使用专用容器,避免交叉污染;
超纯水尽量现取现用,不宜储存;
储存水应标注制备日期、用途和有效期;
微生物实验用水必要时需灭菌;
储水箱和取水口应定期清洗消毒;
不应将未用完的水倒回原储水容器。
长期储存的水即使电导率仍合格,也可能出现微生物升高或有机物增加。因此,水质控制应结合用途设置检测项目。
七、实验室用水与微生物培养基
培养基制备用水会直接影响微生物生长和培养基外观。水中余氯、重金属、铜离子、有机物、清洗剂、微生物、内毒素或硬度离子过高,可能导致目标菌生长差、沉淀增多、pH异常、选择剂失效或显色反应异常。
在培养基生产和研发中,应关注以下问题:
| 水质问题 | 可能影响 |
|---|---|
| 余氯或消毒剂残留 | 抑制微生物生长,影响质控菌恢复 |
| 钙镁离子过高 | 形成沉淀,影响澄清度和离子平衡 |
| 重金属污染 | 抑制敏感菌株,影响酶和代谢反应 |
| 有机物偏高 | 增加微生物背景或干扰显色反应 |
| 微生物污染 | 引入杂菌,影响无菌性 |
| 内毒素偏高 | 影响细胞培养和生物制品相关实验 |
| pH和CO₂变化 | 影响缓冲体系和最终pH |
普通微生物培养基通常可使用符合实验室要求的纯化水、蒸馏水、去离子水或反渗透水。但对细胞培养基、分子生物学试剂、内毒素检测或高灵敏分析,应根据实验要求使用相应级别的超纯水、无核酸酶水或低内毒素水。
八、不同用水的选择建议
| 用途 | 建议用水类型 |
|---|---|
| 普通玻璃器皿清洗末道冲洗 | 去离子水或反渗透水 |
| 普通微生物培养基配制 | 蒸馏水、去离子水或反渗透水,按SOP确认 |
| 精密分析试剂配制 | 超纯水或符合仪器要求的水 |
| PCR、核酸实验 | 无核酸酶水或分子生物学级水 |
| 细胞培养相关实验 | 超纯水制备的无菌、低内毒素用水或商业合格水 |
| 内毒素检测 | 细菌内毒素检查用水或无热原水 |
| 无菌试验用水 | 符合无菌要求的水 |
用水等级应与实验风险相匹配。过低等级的水可能带来干扰;过高等级的水用于普通清洗或低要求实验,则会增加不必要成本。
小结
实验室常见用水包括蒸馏水、去离子水、反渗透水和超纯水。蒸馏水可去除多数不挥发性杂质,但能耗高、制水慢;去离子水主要去除离子,对有机物和微生物控制有限;反渗透水经济高效,适合作为多数实验室纯水系统基础水源;超纯水离子含量极低,适合高灵敏分析和生命科学实验,但必须现取现用。
实验室用水质量不仅取决于制水方式,也取决于储存、管路、容器、取水操作和监测频率。对于微生物培养基和检测工作,应根据用途选择合适等级的水,并重点关注电导率、电阻率、微生物、TOC、内毒素和二次污染风险。




