改进的CCD培养基：原理、配方及空肠弯曲菌分离应用

CCD培养基是一种用于空肠弯曲菌（Campylobacter jejuni）等嗜热型弯曲菌选择性分离的无血固体培养基。CCD名称来源于其主要选择性成分——活性炭（Charcoal）、头孢唑啉（Cefazolin）和去氧胆酸盐（Deoxycholate）。与传统含血弯曲菌培养基相比，其利用活性炭、丙酮酸钠等成分改善培养环境，因此无需额外加入血液，配制相对简便。经典CCD培养基由Bolton等建立，含活性炭、硫酸亚铁、丙酮酸钠、酪蛋白水解物、头孢唑啉和去氧胆酸钠等成分。

CCD培养基的作用原理

空肠弯曲菌营养要求较高，同时对培养环境中的氧化性物质较为敏感。CCD培养基通过“营养支持、氧化保护和选择性抑制”三方面共同建立适宜的分离环境。

营养肉汤和水解酪蛋白提供氨基酸、小肽、无机盐及其他生长所需营养物质；丙酮酸钠除可参与细胞代谢外，还具有一定的活性氧清除作用，有助于降低过氧化物等氧化性物质对弯曲菌的损伤；硫酸亚铁与丙酮酸钠共同构成经典弯曲菌培养基中的生长促进体系。

**活性炭是CCD培养基的重要特征成分。**其较大的比表面积能够吸附培养过程中形成的部分有毒代谢物、氧化性物质及其他抑制性成分，从而改善弯曲菌生长环境。活性炭的加入也使培养基呈明显黑色背景，有利于灰白色弯曲菌菌落的观察。

选择性主要由去氧胆酸钠和头孢唑啉共同建立。去氧胆酸钠属于胆盐类选择剂，可抑制多种非目标菌；头孢唑啉进一步抑制部分伴生细菌，而空肠弯曲菌在相应浓度下具有较好的耐受性。经典CCD培养基采用头孢唑啉约10 mg/L，但其选择性相对有限；后续改良型mCCDA使用头孢哌酮32 mg/L替代头孢唑啉，以进一步提高对背景菌的抑制能力。

改进的CCD培养基配方

以下为每1000 mL培养基的典型组成：

需要特别注意，原资料中的“1%头孢菌素溶液”应明确为1%头孢唑啉（Cefazolin）溶液。经典CCD培养基使用头孢唑啉，而现代常见的**改良CCD琼脂（mCCDA）**则通常使用头孢哌酮，因此在产品开发、文献引用和配方复现时应避免将CCD与mCCDA混为一谈。

制备方法

将干燥营养肉汤、水解酪蛋白、琼脂和活性炭加入约1000 mL去离子水中，混合均匀后加入去氧胆酸钠溶液、硫酸亚铁溶液和丙酮酸钠溶液，充分分散并调节pH至约7.4。

基础培养基可采用121 ℃灭菌15 min。灭菌结束后将培养基冷却至适宜温度，在无菌条件下加入经过除菌处理的头孢唑啉溶液，充分混匀后倾注平板。抗生素不宜随基础培养基一起进行高温高压灭菌，以减少热处理造成的活性损失。

由于培养基含有较高浓度活性炭，制备过程中应充分搅拌，使活性炭均匀悬浮和分散，避免倾注不同平板时出现炭粉含量明显不一致。

用途及培养条件

CCD培养基主要用于空肠弯曲菌及部分嗜热型弯曲菌的选择性分离培养。其重要特点是不需要加入血液，因此也常被归为无血型弯曲菌选择性培养基。

对于空肠弯曲菌的经典分离，一般采用约42 ℃、微需氧条件培养约48 h。42 ℃培养不仅适合空肠弯曲菌等嗜热型弯曲菌生长，同时可以进一步降低部分非目标菌的竞争。经典CCD培养基研究也显示，直接接种平板在42 ℃培养48 h有利于提高空肠弯曲菌的分离效果。

需要注意的是，42 ℃培养条件更偏向于空肠弯曲菌、结肠弯曲菌等嗜热型弯曲菌，并不适合所有 Campylobacter 种。如果检测目标范围扩大至其他弯曲菌，应根据具体检测标准调整培养温度和选择体系。

CCD与mCCDA有什么区别？

CCD培养基是弯曲菌无血选择培养基发展的重要基础配方，其最初采用头孢唑啉10 mg/L作为主要抗菌选择剂。但研究发现其对部分背景菌的抑制能力有限，随后通过以头孢哌酮32 mg/L替代头孢唑啉形成了改良型CCD培养基，即目前更常见的mCCDA（Modified Charcoal Cefoperazone Deoxycholate Agar，改良炭粉头孢哌酮去氧胆酸盐琼脂）。

因此，从培养基发展关系来看，CCD与mCCDA具有相同的活性炭—去氧胆酸盐基础设计，但选择性抗生素体系存在明显区别。在实际应用和产品资料编写中，应根据具体配方准确区分两种培养基，不能简单将“CCD”“改良CCD”和“mCCDA”作为完全相同的名称使用。