玉米粉中玉米赤霉烯酮含量的免疫亲和柱法 （Copure® 玉米赤霉烯酮免疫亲和柱）
- 2019-08-13 17:10:56
- 逗点生物
一、样品提取
称取 5.00 g（精确到 0.01 g）玉米粉到 50 mL 离心管，加入 1.0 g NaCl 和 20 mL 70 % 甲醇水溶液，振荡 30min，4000 r/min 下离心 5 min，取上清液 1 mL 于 15 mL离心管中，加水 4 mL，混匀待净化。二、免疫亲和柱净化
实验材料：Copure® 玉米赤霉烯酮免疫亲和柱，3 mL
(1) 上样：将 20 mL 上样器连接于免疫亲和柱上端，取待净化样品 1 mL 以 1-2 滴 / 秒的速度通过免疫亲和柱，弃掉流出的液体。(2) 淋洗和洗脱：加入 20 mL 水淋洗柱子，分两次淋洗，弃掉流出的液体；抽干小柱；加入 3 mL 甲醇缓慢洗脱亲和柱，流速约为 2-3 秒 / 滴。
(3) 重新溶解：50 ℃下氮吹至近干，加 1 mL 50 % 乙腈水溶液溶解，0.22 μm 滤膜过滤，供 HPLC 分析。
三、仪器条件
设备：Waters Alliance 2695色谱柱：Inertsustain C18 (4.6 mm×250 mm, 5 μm)
检测器：Waters 2475 荧光检测器
检测波长：激发波长：274 nm 发射波长：440 nm
流动相：A：乙腈 B：水 C：甲醇
洗脱方式：等度洗脱，A：B：C=46：46：8
流速：1 mL/min
进样体积：20 μL
四、实验结果
表 1 1.0 mg/kg 玉米粉中玉米赤霉烯酮的添加回收结果
图 1 添加水平为 1.0 μg/kg 玉米粉中玉米赤霉烯酮检测的液相色谱图
五、订购信息
