玉米、酱油中呕吐毒素的免疫亲和柱方法 （Copure® 呕吐毒素免疫亲和柱）
- 2019-08-19 16:37:47
- 逗点生物
一、样品提取
1、玉米样品前处理称取 5.00 g（精确到 0.01 g）经粉碎玉米置 50 mL 离心管，加入 20 mL 水，涡旋混匀，振荡 10 min，4000 r/min 下离心 5 min，上清液全部过滤，再加 20 mL 水重复提取一次，合并滤液，加水定容至 50 mL，滤液待用。2、酱油样品前处理称取老抽酱油 1.00 g（精确到 0.01 g）到 50 mL 离心管，加入 10 mL 水，振荡 10 min，过玻璃纤维滤纸，用 2×5 mL水冲洗离心管两次，合并滤液，待净化。
二、免疫亲和柱净化
实验材料：Copure® 呕吐毒素免疫亲和柱，3 mL
(1) 上样：将 20 mL 上样器连接于免疫亲和柱上端，取待净化液样品液 1 mL 以 1-2 滴 / 秒的速度通过免疫亲和柱，弃掉流出的液体。(2) 淋洗和洗脱：加 20 mL 水淋洗柱子 , 分两次淋洗，弃掉流出的液体，抽干小柱；加入 4 mL 甲醇缓慢洗脱（先浸泡约 30s），分两次洗脱，流速约为 2-3 秒 / 滴，收集流出液。
(3) 重新溶解：在 50 ℃下氮吹至近干，加 20 % 甲醇水溶液 1 mL 重新溶解。经 0.22 μm 滤膜过滤，待上机测试。
三、仪器条件
设备：Waters Alliance 2695色谱柱：Inertsustain-C18 (4.6 mm×250 mm, 5 μm)
检测器 ：Waters 2996 DAD 检测器
检测波长：218 nm
流动相：A：甲醇 B：水
洗脱方式：等度洗脱，A：B=20：80
流速：1.0 mL/min
进样体积：20 μL
四、实验结果
表 1 1.0 mg/kg 玉米、酱油中呕吐毒素的添加回收结果
图 1 添加水平为 1.0 mg/kg 呕吐毒素检测的液相色谱图
五、订购信息
