食品中维生素 D 含量检测的固相萃取方法（Copure® Silica）
- 2019-08-22 14:20:48
- 逗点生物
一、样品提取
1、奶粉固体样品处理准确称取 2.0 g 奶粉置于 50 mL 离心管中，加入 5 mL 柠檬酸水溶液（200 g/L），4 mL 二甲基亚砜，5 mL 甲醇，于振荡器中振荡 10 min，再加 15 mL 提取液（正己烷：甲基叔丁基醚 =1:1，v/v）振荡 10 min，在 4000 r/min 下离心5 min，取上清液；向离心管中重新加 10 mL 提取液，重复提取一次，合并两次上清液，于 50 ℃下氮吹至近干，加入 5 mL 正己烷重新溶解，备用。
2、滴剂液体样品
取滴剂胶囊一粒，从中剪开置于 50 mL 离心管中，加入10 mL 提取液（乙酸乙酯：正己烷 =1:9，v/v）于振荡器振荡提取 10 min，转移上清液，向离心管中再加 10 mL提取液，重复提取一次，合并两次上清液，备用。
二、SPE柱净化
实验材料： Copure® Silica，2000 mg/12 mL
(1) 活化：Silica 柱使用前用 10 mL 乙酸乙酯活化，10 mL正己烷平衡。(2)上样和洗脱：取备用液加入固相萃取柱中，弃去流出液；取 5 mL 淋洗液（乙酸乙酯：正己烷 =5:95）分两次淋洗，弃去流出液；抽干小柱；取 20 mL 乙酸乙酯洗脱，收集洗脱液，于 50 ℃氮吹至近干（整个上样、洗脱过程控制流速在 1 mL/min 内）。
(3) 重新溶解：加 1 mL 甲醇重新溶解、混匀，经 0.22 μm滤膜过滤，供上机测试。
三、仪器条件
设备：Waters Alliance 2695色谱柱：InertSustain-C18 (4.6 mm×250 mm, 5 μm)
检测器：Waters 2996 DAD 检测器
检测波长：268 nm
流动相：A：甲醇 B：水
洗脱方式：等度洗脱，A：B=98：2
流速：1.0 mL/min
进样体积：20 μL
四、实验结果
表 1 1.25 mg/kg 各基质中维生素 D 2 、D 3 的添加回收结果
图2 添加水平为1.25 mg/kg维生素D 2 检测的液相色谱图
五、订购信息
