血清中皮质甾类药物检测的快速萃取方法（CommaSep® SLE）
- 2019-08-22 15:02:21
- 逗点生物
图 1 使用 CommaSep® SLE 液液萃取柱进行液液萃取的流程
一、样品提取
将血清样品纯水稀释并混匀，使样品最终的 pH 接近 8.0。取一部分空白稀释血清备用；剩下的空白稀释血清加入一定体积的氢化可的松和曲安西龙储备液，配制成浓度为1.5mg/L 的氢化可的松和曲安西龙加标血清。二、SLE 柱净化
(1) 上样：向 SLE 柱中加入 1 mL 预处理的样品，加负压启动流速 (5-15 秒 )，然后让样品吸附于填料中约 5 分钟。(2) 洗脱：向柱中加入 4 mL 乙酸乙酯，使溶剂通过重力流出并收集洗脱液，然后再向柱中加入 4 mL 的乙酸乙酯。在收集结束后加适当的正力或负压 (-15" Hg)2 分钟并收集最终洗脱出的溶剂。
(3) 重新溶解：将上述收集的洗脱液于 35 ℃左右的温度低真空下浓缩，再用缓氮气流去除溶剂，使其浓缩至近干。取 1 mL(60:40, v/v) 的水 / 甲醇定容，供液 HPLC 分析。
三、仪器条件
设备：Waters Alliance 2695色谱柱：Welch Ultimate XB-C18 (4.6 mm×250 mm, 5 μm)
检测器：Waters 2487 紫外检测器
检测波长：245 nm
流动相：A：乙腈 B：0.1 % 甲酸水溶液
洗脱方式：梯度洗脱
表 1 梯度洗脱条件
柱温：室温
流速：1 mL/min
进样体积：20 µL
四、实验结果
表 2 氢化可的松和曲安西龙的回收率
