一、样品提取

称取 5.0 g 样品于 50 mL 离心管中，加入浓度为 1 µg/mL 同位素内标利巴韦林 -13C5 溶液 10 µL，加入 12 mL 20 g/ L 三氯乙酸水溶液和 2.5 mL 乙腈，涡旋混匀 30 s，超声10 min， 于 8000 r/min 离心 5 min， 上清液全部转移至

50 mL 离心管中，再向样品中加入 10 mL 20 g/L 三氯乙酸水溶液重复提取一次，合并两次提取液，用三氯乙酸水溶液定容至 25 mL，再准确移取 5 mL，用氨水调节 pH 至 8.5

（±0.1）待净化（本实验是采用阴性样本做基质加标实验，故省略酶解步骤）。

二、SPE 净化（Copure® PBA, 100 mg/3 mL）

活化：向 PBA 柱中依次加入 3 mL 乙腈，3 mL 0.25 mol/L

乙酸铵缓冲液（pH=8.5）进行活化。

上样和洗脱：取上述待净化液过柱，控制流速不超过 1 滴 / 秒，然后用 3 mL 0.25 mol/L 乙酸铵缓冲液（pH=8.5）淋洗小柱，弃去全部流出液，抽干小柱，用 2 mL 0.1 mol/L 甲酸水溶液洗脱，抽干小柱，收集全部洗脱液。 上机：取上述洗脱液过 0.22 µm PES 水系滤膜，供上机分析。 

三、标曲配制 

采用内标法定量，分别精密量取适量的利巴韦林标准溶液 和同位素内标利巴韦林 -13C5 工作液，用 0.1 mol/L 甲酸 水溶液配制成适当浓度的标准工作溶液。 

四、仪器条件 

色谱条件 仪器：UPLC-MS/MS（Thermo Fisher TQS Endura） 色谱柱：CS211003H（HILIC，2.1 mm×100 mm，3 µm） 流动相：A：5 mmol/L 乙酸铵溶液（含 0.1% 甲酸） B：乙腈 洗脱方式：梯度洗脱，见表 1 

表 1 梯度洗脱程序

柱温：30℃ 

进样量：2 µL 

质谱条件 

离子源：HESI 

电喷雾电压：3500V 

鞘气压力：40 arb 

辅气压力：1 arb 

离子传输管：300℃ 

辅气温度：400℃ 

表 2 组分名称、保留时间及特征离子一览表（* 为定量离子）

五、实验结果 

表 3 添加水平为 2.0 µg/kg 动物源性食品中利巴韦林加标 回收实验结果

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