血清中脂溶性维生素含量的分析（Copure® SLE）
- 2022-07-12 16:35:43
- 逗点生物
一、设备和材料
1）Copure® 96 孔SLE 固相支持液液萃取板2）biocomma® 多功能混匀仪
3）biocomma® 96 孔氮吹仪4）biocomma® 96 孔正压提取装置
二、仪器条件
仪器：Thermo Scientific TSQ Endura
色谱柱：CommaSil® C18 (2.1mm×50 mm, 3.5 µm) 柱温：40℃
进样量：5 µL
流动相：A：水（含 0.1% FA） B：甲醇（含0.1% FA） 洗脱方式：梯度洗脱
表1 流动相梯度洗脱条件
时间（min） |
流速（mL/min） |
A（%） |
B（%） |
0 |
0.4 |
95 |
5 |
0.30 |
0.4 |
95 |
5 |
0.50 |
0.4 |
22 |
78 |
4.00 |
0.4 |
0 |
100 |
5.50 |
0.4 |
0 |
100 |
5.80 |
0.4 |
95 |
5 |
6.50 |
0.4 |
95 |
5 |
电喷雾电压：3500 V鞘气压力：35 arb 辅气压力：2 arb离子传输管：350℃
辅气温度：340℃ 采集方式：多反应监测表 2 各组分母离子和子离子检测的离子对参数
分析物 |
母离子（m/z） |
子离子（m/z） |
离子化方式 |
VA |
269.1 |
93.1 |
ESI+ |
119.2 |
|||
VA-IS |
275.2 |
96.2 |
ESI+ |
25(OH)D2 |
413.4 |
395.3 |
ESI+ |
355.3 |
|||
25(OH)D2-IS |
401.2 |
211.4 |
ESI+ |
269.3 |
|||
25(OH)D3 |
401.4 |
383.4 |
ESI+ |
365.3 |
|||
25(OH)D3-IS |
389.4 |
211.5 |
ESI+ |
229.2 |
|||
VE |
431.4 |
165.2 |
ESI+ |
137.3 |
|||
VE-IS |
437.3 |
171.2 |
ESI+ |
143.2 |
|||
VK1 |
451.4 |
187.1 |
ESI+ |
199.2 |
|||
VK1-IS |
458.3 |
194.2 |
ESI+ |
206.2 |
三、实验步骤
1、样品提取
取100 µL 血清置1.5 mL 离心管中，加入100 µL 内异丙醇（含内标），2500 rpm 涡旋1 min 混合均匀，7000 rpm 瞬离10 s，再加入100 µL 超纯水，2500 rpm 涡旋1 min 混合均匀后7000 rpm 瞬离10 s。
2、样品净化
上样：将预混合好的样液全部上样到400 µL/mL 的LE 板上， 待全部样品浸润后静置5 min。
洗脱：用2.10 mL 异辛烷分三次进行洗脱，最后一洗脱结束， 将SLE 板与收集板整体放到正压装置上，开启压力至10-
15 psi，约5 s，完全收集洗脱液。
氮吹复溶：将洗脱液40℃下用氮吹仪氮吹至干，使50 µL 70% 甲醇复溶，2500 rpm 涡旋3 min，2000 rpm、4℃离心
1 min，上机进样检测。
四、实验结果
表3 板内稳定性结果
指标 |
VA |
25(OH)D2 |
25(OH)D3 |
VE |
VK1 |
CV（%，n=8） |
7.21 |
5.78 |
9.89 |
4.6 |
6.55 |
表4 加标回收率结果
目标物 |
加标浓度（ng/mL) |
平均回收率（%，n=3） |
25(OH)D2 |
50 |
77.90 |
25(OH)D3 |
50 |
88.50 |
VA |
1000 |
76.10 |
VE |
2000 |
102.80 |
由以上数据表明：Copure® 96 孔SLE 固相支持液液萃取板对脂溶性维生素的检测回收率在70-110%之间，且稳定性好，满足测试要求。
订购信息
|
描述 |
包装 |
MSLE96400 |
Copure® 96 孔SLE 固相支持液液萃取板，400 µL/2 mL |
1块/盒 |
BCM2500 |
biocomma® 多功能混匀仪 |
1台/箱 |
BCN9602 |
biocomma® 96 孔氮吹仪 |
1台/箱 |
BCY9601 |
biocomma® 96 孔正压提取装置 |
1台/箱 |
