一、设备和材料

1）Copure® MS WCX 96 孔板2）biocomma® 多功能混匀仪3）biocomma® 96 孔氮吹仪4）biocomma® 96 孔正压提取装置

二、仪器条件

仪器：Thermo Scientific TSQ Endura

色谱柱：CommaSil® PFP (2.1mm×50mm, 3 µm) 柱温：45℃进样量：5 µL

流动相：A：水（含0.1%FA）   B：甲醇（含 0.1%FA） 洗脱方式：梯度洗脱

表1 流动相梯度洗脱条件

电喷雾电压：3500 V鞘气压力：25 arb 辅气压力：1 arb离子传输管：300℃

辅气温度：360℃ 采集方式：多反应监测表 2 各组分母离子和子离子检测的离子对参数

三、实验步骤

3.1 血浆样本的预处理

移取250 µL 血浆样品于1.5 mL 的离心管中，加入250 µL 浓度为50 mM 的乙酸铵溶液，再加入内标工作溶液。混合均匀，待用。

3.1 活化WCX 板

MS WCX 96 孔板需依次用200 µL 甲醇和200 µL H2O 预处理进行活化。

3.2 样品处理

将混合均匀的待处理样品加入到经过活化的MS WCX 96 孔板中。

3.3 淋洗净化

加样后，依次使用200 µL 浓度为20 mM 的乙酸铵和200 µL 50:50 的乙腈: 异丙醇对孔进行清洗。然后将 MS WCX 96 孔板在正压的氮气条件下干燥 30s，以尽可能多地除去柱床中的溶剂。

3.4 洗脱

使用2 份50 µL 含有2% 甲酸的 85:15 的ACN:H2O，将目标化合物由MS WCX 96 孔板洗脱到96 孔样品收集板中。

3.5 吹干复溶

将收集板于氮气条件下进行吹干处理，吹干后用50 µL 含0.1% 甲酸的水溶液进行复溶。

3.6 上机检测

将复溶液注入LC-MS/MS 系统中进行检测。

备注：① 内标工作液的浓度和体积可根据实验室的方法进

   行适当调整。

  ② 标准曲线的前处理方法与样本相同。

四、实验结果

4.1 血浆样本检测结果

左侧为某进口品牌的WCX 处理的血浆样本上机检测结果， 右侧为Copure® MS WCX 96 孔板（MWCX9603）处理的血浆样本上机检测结果。通过相同样本进行前处理，两者所得

到的结果相近。

4.1 稳定性结果

该部分实验从不同的生产批次中抽取WCX 板，对不同的孔位进行测试。从NMN 和MN 的结果可以看出，该产品的稳定性良好。

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