一、设备和材料

1）Copure® MS HLB（30 mg /2 mL） 2）biocomma® 多功能混匀仪3）biocomma® 96 孔正压提取装置4）biocomma® 96 孔氮吹仪5）biocomma® 热封膜仪

二、仪器条件

仪器：Thermo Scientific TSQ Endura

色谱柱：CommaSil® C18 (2.1mm×100 mm, 3 µm) 柱温：35℃

进样量：5 µL

流动相：A：水    B：乙腈（含 0.1%FA） 洗脱方式：梯度洗脱

表1 流动相梯度洗脱条件

电喷雾电压：3500 V 鞘气压力：40 arb

辅气压力：2 arb 离子传输管：380℃ 辅气温度：350℃ 离子化方式：ESI+

采集方式：多反应监测

表2 各组分母离子和子离子检测的离子对参数

三、样本前处理

3.1 样本预处理

移取200 µL 血浆样本于1.5 mL 的离心管中，再加入10 µL 适量浓度的内标，涡旋混匀。接着加入 50 µL 孵育缓冲溶液，涡旋混匀，37℃孵育1h。再加入10 µL10% 甲酸， 涡旋混匀。

3.2 样品净化（30 mg/2 mL 96 孔HLB 板）

活化：加入1 mL 甲醇到96 孔HLB 板中进行活化；

平衡：加入1 mL0.1% NH3.H20 到96 孔HLB 板中进行平衡； 上样：取250 µL 预处理上清液至96 孔板中，低压力正压条件下使样液缓慢通过板孔；

淋洗：用1 mL0.1% NH3.H20 溶液洗脱干扰物质；

洗脱：用400 µL 2% NH3.H20 的50% 甲醇溶液进行洗脱， 50℃氮吹至干；

复溶：用200 µL 含0.4% 甲酸的 30% 甲醇复溶，涡旋混匀， 上LC-MS/MS 系统进行检测。

其中：缓冲液配制方法：

终止缓冲液：分别称取12.1 g Tris ( 三羟甲基氨基甲烷 ) 和7.4 g EDTA 于100 mL 烧杯中，用80 mL 超纯蒸馏水溶解， 再用冰醋酸调节PH 至5.5，最后用超纯水定容至 100 mL； 抑制剂：称取0.174 g pmsf( 丝氨酸蛋白酶抑制剂 )，溶解在10 mL 甲醇中，储存于5℃；再称取0.3 gSBTI（大豆蛋白酶抑制剂），溶解在10 mL 蒸馏水水中，储存于5℃。孵育缓冲液：临用前分别移取100 µL pmsf 和SBTI 液于10 mL 终止缓冲液中，摇匀备用。

四、实验结果

1. 血浆基质中血管紧张素色谱图

图1 10ppb 血管紧张素1 基质加标检测色谱图图2 0ppb 血管紧张素2 基质加标检测色谱图

2. 血浆基质中血管紧张素与竞品比对回收率和稳定性测定结果

表1 血浆基质中血管紧张素与竞品比对回收率和稳定性测定结果

从表1 可以看出， 在 3 种加标浓度梯度下，Copure® MS HLB 测定血管紧张素1 和2 两种目标化合物的回收率和稳定性与竞品O 品牌无显著差异，说明性能基本一致。