血清中胆汁酸含量的分析 (Copure® PPT) …
- 2022-07-12 16:39:00
- 逗点生物
一、设备和材料
1）Copure® 96 孔PPT 蛋白沉淀过滤板2）biocomma® 多功能混匀仪3）biocomma® 96 孔正压提取装置4）biocomma® 热封膜仪
二、仪器条件
仪器：Thermo Scientific TSQ Endura
色谱柱：CommaSil® C18 (2.1mm×100 mm, 3 µm) 柱温：35℃
进样量：8 µL
流动相：A：水（ 含5 mmol/L 乙酸铵和0.05% 甲 酸）
B：甲醇 洗脱方式：梯度洗脱
表1 流动相梯度洗脱条件
时间（min） |
流速（mL/min） |
%B |
Curve |
0 |
0.35 |
30 |
5 |
2.0 |
0.35 |
90 |
5 |
4.0 |
0.35 |
90 |
5 |
4.1 |
0.35 |
30 |
5 |
6.0 |
0.35 |
30 |
5 |
电喷雾电压：2500 V 鞘气压力：15 arb
辅气压力：2 arb 离子传输管：350℃ 辅气温度：320℃ 离子化方式：ESI-
采集方式：多反应监测
表2 各组分母离子和子离子检测的离子对参数
Compound |
Precursor (m/z) |
Product (m/z) |
Collision Energy (V) |
RF Lens (V) |
CA |
407.3 |
289.2 |
37.67 |
198 |
343.3* |
32.78 |
|||
CA-d4 |
411.3 |
290.2 |
38.62 |
233 |
347.3* |
34 |
|||
DCA |
391.3 |
345.3* |
38.43 |
214 |
|
327.28 |
33.92 |
||
DCA-d4 |
395.3 |
349.3* |
32.97 |
238 |
346.3 |
38.55 |
|||
GLCA |
464.3 |
74.2* |
34.38 |
233 |
402.3 |
33.66 |
|||
GLCA-d4 |
468.4 |
74.2* |
34.38 |
246 |
406.4 |
34.11 |
|||
TCA |
514.4 |
123.9 |
53.37 |
299 |
106.8 |
52.27 |
|||
TCA-d4 |
518.4 |
124 |
52.84 |
299 |
500.4 |
51.93 |
三、样本前处理
取100 µL 血清于PPT 的孔中，再移取300 µL 乙腈于PPT 的孔中，用热封膜仪封膜后，1500 rpm 涡旋5 min.。将PPT 板与接收板置于正压提取装置中，调节压力，使滤液的流速保持1-2 秒/ 滴，收集滤液。吸取 200 µL 上清液于另一收集板孔中，45℃氮吹干，残渣用100 µL 30% 甲醇溶液
复溶，离心2min，吸取上清液上LC-MS/MS 系统中进行检测。
备注：标准曲线的前处理方法与样本相同。
四、实验结果
回收率结果
表3 血清中胆汁酸加标回收率结果
目标物 |
加标浓度（ppb） |
回收率（%，n=6） |
CV（%，n=6） |
CA |
10 |
81.5 |
9.57 |
100 |
81.8 |
3.03 |
|
1000 |
97.6 |
5.26 |
|
DCA |
10 |
105.6 |
8.70 |
100 |
81.3 |
9.65 |
|
1000 |
96.3 |
5.27 |
|
GLCA |
100 |
104.9 |
12.1 |
1000 |
88.7 |
6.38 |
|
TCA |
10 |
110.7 |
12.7 |
100 |
86.1 |
8.44 |
|
1000 |
99.7 |
5.10 |
从表3 可以看出，不同加标浓度下，所测四种胆汁酸回收率良好，在80%-110% 之间。
订购信息
货号 |
名称 |
包装 |
MPPT9601 |
Copure® 96 孔PPT 蛋白沉淀过滤板，1 mL/well |
1 块/ 盒 |
MPPT9602 |
Copure® 96 孔PPT 蛋白沉淀过滤板，2 mL/well |
1 块/ 盒 |
BCM2500 |
biocomma® 多功能混匀仪 |
1 台/ 箱 |
BCY9601 |
biocomma® 96 孔正压提取装置 |
1 台/ 箱 |
BCS9601 |
biocomma® 热封膜仪 |
1 台/ 箱 |
