血浆中普瑞巴林和替米沙坦含量的分析（Copure® PPT）
- 2022-07-12 16:39:00
- 逗点生物
一、设备和材料
1）Copure® 96 孔PPT 蛋白沉淀板2）biocomma® 多功能混匀仪3）biocomma® 96 孔氮吹仪4）biocomma® 96 孔正压提取装置5）biocomma® 热封膜仪
二、仪器条件
仪器：Thermo Scientific TSQ Endura
色谱柱：CommaSil® AQ (2.1 mm×100 mm, 1.9 µm) 柱温：30℃
样品温度：10℃ 进样量：2 µL
流动相：A：水（含0.1% FA）
B：甲醇 洗脱方式：梯度洗脱
表1 流动相梯度洗脱条件
时间（min） |
流速（mL/min） |
A（%） |
B（%） |
0 |
0.3 |
90 |
10 |
1 |
0.3 |
90 |
10 |
1.1 |
0.3 |
30 |
70 |
4.6 |
0.3 |
30 |
70 |
4.7 |
0.3 |
90 |
10 |
6 |
0.3 |
90 |
10 |
电喷雾电压：3500 V 鞘气压力：35 arb 辅气压力：2 arb
离子传输管：350℃ 辅气温度：340℃
采集方式：多反应监测
表2 化合物的保留时间及离子对参数
分析物 |
保留时间 |
母离子（m/z） |
子离子（m/z） |
离子化方式 |
普瑞巴林 |
2.98 |
160.1 |
142.1* |
ESI+ |
124.1 |
||||
97.2 |
||||
替米沙坦 |
4.80 |
561.2 |
306.1 |
ESI+ |
276.1* |
||||
211.0 |
注：* 表示定量离子对
三、实验步骤
1、样品提取
将25 µL 血浆和25 µL 50% 甲醇水溶液混合均匀。
2、样品净化
1） 向96 孔PPT 板中加入250 µL 甲醇，再将上述混好的血浆加到96 孔PPT 板中，封膜后在多功能混匀仪上1000 r/min 涡旋4 min 混匀。
2） 使用正压装置，调节压力，控制流速1 滴/ 秒，将 PPT 板上液体压入到96 孔收集板中。
3） 将收集板置于 96 孔氮吹仪上，40℃氮气吹干。
4） 向收集板中各孔中加入500 µL 0.1% 甲酸水溶液，涡旋混匀供上机测试。
四、实验结果
使用空白血浆样品配制7 个不同浓度的校准标曲点，普瑞巴林和替米沙坦的浓度分别为：5 ng/mL、10 ng/mL、20 ng/mL、50 ng/mL、100 ng/mL、200 ng/mL、500 ng/mL。所得样品采用上述前处理方法净化并上机检测，基质标准 曲线见表3。另取血浆样品添加不同浓度目标物进行加标回收实验，测定结果见表4。
表3 基质标准曲线
化合物 |
回归方程 |
线性系数(r) |
普瑞巴林 |
Y = 57917.7+8282.26X |
0.9991 |
替米沙坦 |
Y = 27566.6+4207.12X |
0.9987 |
表4 血浆中普瑞巴林和替米沙坦加标回收实验结果（n=3）
化合物 |
加标浓度（ng/mL） |
平均回收率（%） |
RSD（%） |
普瑞巴林 |
10 |
87.1 |
1.1 |
50 |
101.6 |
8.1 |
|
100 |
102.7 |
6.1 |
|
替米沙坦 |
10 |
65.8 |
1.6 |
50 |
105.3 |
7.8 |
|
100 |
108.2 |
7.4 |
订购信息
|
描述 |
包装 |
MPPT 9601 |
Copure® 96 孔PPT 蛋白沉淀过滤板，1 mL/well |
1块/盒 |
BCM2500 |
biocomma® 多功能混匀仪 |
1台/箱 |
BCN9602 |
biocomma® 96 孔氮吹仪 |
1台/箱 |
BCY9601 |
biocomma® 96 孔正压提取装置 |
1台/箱 |
BCS9601 |
biocomma® 热封膜仪 |
1台/箱 |
