食品中4-甲基咪唑的固相萃取法（Copure^® MCX）

《GB 5009.282-2020 食品安全国家标准 食品中1-甲基咪唑、2-甲基咪唑及4-甲基咪唑的测定》

一、样品提取  

准确称取均匀的样品2.0 g（精确至0.001 g）于50 mL离心管中，加入2 %甲酸水溶液至20 mL，混匀，10000 r/min离心5 min，上清液待净化。

二、样品净化（Copure^®MCX，200mg/6mL）

活化：依次用5 mL甲醇，5 mL水活化固相萃取小柱。

上样：取待净化样品10 mL过柱，弃掉流出的液体。

淋洗和洗脱：分别加入2 mL 2 %甲酸水、5 mL水、5 mL甲醇淋洗固相萃取小柱，弃去流出的液体；加入8 mL 5 %氨水甲醇洗脱固相萃取小柱，收集洗脱液。

重新溶解：45 ℃下氮吹至近干，加入乙腈-5 mmol/L乙酸铵（9+1）溶液1 mL复溶，涡旋30s，过0.22μm有机系滤膜，上机测试。

三、标准曲线溶液的制备

取适量标液，用乙腈-5 mmol/L乙酸铵（9+1）溶液稀释成浓度分别为10 μg/L、20 μg/L、50 μg/L、100 μg/L、200 μg/L、400 μg/L的标准上机溶液。

四、仪器条件

（1）色谱条件

 仪器：UPLC-MS/MS（Thermo Fisher TSQ Endura）

 色谱柱：GOWON HILIC (2.1 mm×100 mm，2.7 μm)

 流动相：A：5 mmol/L乙酸铵   B：乙腈

 洗脱方式：梯度洗脱，见表1

 流速：0.6 mL/min

 柱温：35℃

 进样量：5 μL

表1 梯度洗脱程序

（2）质谱条件

 离子源：HESI

 电喷雾电压：3500 V

 鞘气压力：35 arb

 辅气压力：5 arb      

 离子传输管：380 ℃

 辅气温度：350 ℃

表2 组分名称、保留时间及特征离子一览表（*为定量离子）

五、实验结果

表3  4-甲基咪唑加标回收实验结果

图1 百香果汁中添加水平为100.0 μg/kg时4-甲基咪唑的离子流图

 图2 蜂蜜中添加水平为100.0 μg/kg时4-甲基咪唑的离子流图

六、订购信息