食品中11种合成着色剂的固相萃取方法（Copure^®WAX）

《GB 2760—2014食品添加剂使用卫生标准》

一、样品提取

1.1 液体及部分固体试样（饮料类、果冻等）

称取试样2 g于50 mL离心管中，加入25 mL乙醇氨水溶液，涡旋1 min，50 ℃超声提取15 min，8000r /min离心5 min，取上清液置于50 mL离心管中，加入15 mL乙醇氨水溶液重复提取1次，离心后合并上清液，用乙醇氨水溶液定容至50 mL，混匀后得提取液。准确吸取提取液10 mL，50 ℃下氮气浓缩至2 mL左右，加入10 mL 5%甲醇水溶液溶解，混匀作为待净化液。

1.2 含油量较大的试样（糕点、酱卤肉、薯片等）

称取试样2 g于50 mL离心管中，加入20 mL石油醚，涡旋1 min，涡旋振摇10 min，以8000r /min离心5 min，弃去上清液，除尽石油醚溶剂，加入25 mL乙醇氨水溶液至除油试样中，涡旋1 min，50 ℃超声提取15 min，8000r /min离心5 min，取上清液置于50 mL离心管中，加入15 mL乙醇氨水溶液重复提取1次，离心后合并上清液，用乙醇氨水溶液定容至50 mL，混匀后得提取液。准确吸取提取液10 mL，50 ℃下氮气浓缩至2 mL左右，加入10 mL 5%甲醇水溶液溶解，混匀作为待净化液。

乙醇氨水溶液：无水乙醇700mL，氨水4mL，用水稀释定容到1L，混匀即得。

二、样品净化（Copure^® WAX, 150 mg/6mL）

活化：固相萃取柱依次用6mL甲醇和6mL水活化；

上样：将上述待净化液过柱，弃掉流出液；

淋洗：依次用6 mL水和6ml甲醇淋洗，抽干小柱；

洗脱：6 mL 2%氨化甲醇溶液洗脱，收集洗脱液，于45 ℃氮吹仪浓缩至0.3 mL左右，加入乙酸铵溶液（pH=9.0）复溶至2mL，涡旋混匀，过PTFE滤膜，上机。

乙酸铵溶液（pH=9.0）:称取1.54g乙酸铵，加水溶解并定容至1000mL,加氨水调pH=9.0.

三、仪器条件

仪器：液相色谱仪，ThermoFisher U3000

色谱柱：Agilent ZORBAX SB-C18 (4.6 mm×250 mm，5 μm)

流动相：A：0.02mol/L乙酸铵溶液  B：甲醇

洗脱方式：梯度洗脱，见表1

流速：1.0 mL/min      

柱温：30 ℃     

进样量：10 μL

检测器：紫外检测器  

检测器波长范围：400~800 nm，柠檬黄、喹啉黄的测定波长为415 nm；新红、苋菜红、胭脂红、日落黄、诱惑红、 酸性红、赤藓红的测定波长为520 nm；亮蓝、靛蓝的测定波长为630 nm。

表1 梯度洗脱程序

四、实验结果

（1）加标回收实验结果

表2 加标回收结果

（2）标液、果冻、饮料、蛋糕、酱卤鸭翅根和薯片中着色剂色谱图

图1 11种合成着色剂标准溶液（5.0 mg/kg)色谱图

图2果冻添加水平（5.0 mg/kg）中11种着色剂色谱图

图3饮料添加水平（5.0 mg/kg）中11种着色剂色谱图

图4蛋糕添加水平（5.0 mg/kg）中11种着色剂色谱图

图5酱卤鸭翅根添加水平（5.0 mg/kg）中11种着色剂色谱图

图6薯片添加水平（5.0 mg/kg）中11种着色剂色谱图

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