奶茶中8种合成着色剂的含量测定（Copure^®WAX）

一、样品提取

称取2.0 g试样于50 mL离心管中，加入5 mL硫酸锌溶液（120 g/L），混匀后，乙醇氨水溶液25 mL，涡旋混合1 min，超声提取15 min，以8000 r/min离心5 min，取上清液于干净50 mL离心管中，再加入15 mL提取液重复提取1次，合并上清液，定容到50 mL（若浑浊再次离心），取10 mL上清液，在50℃下氮气浓缩至2 mL，再加入10 mL 5%甲醇水溶液，混匀后作为待净化液。

注：乙酸氨水溶液：乙醇700 mL，氨水4 mL，用水定容至1 L。

二、样品净化（Copure^® WAX, 150 mg/6mL）

活化：依次用6mL甲醇和6mL水活化；

上样：将上述待净化液过柱，弃掉流出液；

淋洗：依次用5 mL水和5 mL甲醇淋洗，抽干小柱；

洗脱：8 mL 2%氨化甲醇溶液洗脱，收集洗脱液，于45 ℃氮吹仪浓缩至0.3 mL左右，加入0.02mmol/L乙酸铵溶液（pH=9.0）复溶至2mL，涡旋混匀，过PTFE滤膜，上机。

三、仪器条件

仪器：液相色谱仪，ThermoFisher U3000

色谱柱：Agilent ZORBAX SB-C18 (4.6 mm×250 mm，5 μm)

流动相：A：0.02mol/L乙酸铵溶液  B：甲醇

洗脱方式：梯度洗脱，见表1

流速：1.0 mL/min      

柱温：30 ℃     

进样量：10 μL

检测器：紫外检测器  

检测器波长范围：400~800 nm，柠檬黄测定波长为415 nm；新红、苋菜红、胭脂红、日落黄、诱惑红、赤藓红测定波长为520 nm；亮蓝测定波长为630 nm。

表1 梯度洗脱程序

四、实验结果

（1）加标回收实验结果

表2 加标水平为5 mg/kg回收结果

（2）奶茶中着色剂色谱图

图1奶茶添加水平（5.0 mg/kg）中8种着色剂色谱图

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