腊肠和豆皮中红2G、二甲基黄和二乙基黄的测定                

《BJS 202505 调味品、豆制品、肉制品等食品中红2G、二甲基黄、二乙基黄的测定》

针对《BJS 202505 调味品、豆制品、肉制品等食品中红2G、二甲基黄、 二乙基黄的测 定》标准，逗点生物选取了豆皮和腊肠2种食品基质完成了方法验证工作，方法验证结果显示，加标回收率均大于 85%。

一、 样品前处理

1.二甲基黄和二乙基黄

提取：称取2g试样于50mL离心管中，加入10mL乙腈，涡旋混匀1min，超声提取10min，10000r/min离心10min，上清液转移至20mL容量瓶中；残渣再加入5mL乙腈，重复提取一次，合并两次提取液，用乙腈定容至刻度，混匀，待净化。

净化：逗点生物 QuEChERS净化管（货号：COQ015132H）加入2mL水，涡旋混匀活化后，准确移取10mL待净化液于离心管中，涡旋1min，4000 r/min离心5min。

盐析：取净化后的全部上清液于装有1.5g无水硫酸镁和0.5g氯化钠的离心管（货号：COQ015147H）中，涡旋1min，4000 r/min离心5min。

浓缩与复溶：取盐析后的上清液至氮吹管中，40℃浓缩至近干，精密加入1mL 乙酸铵（10mmol/L）：乙腈=1：1溶液复溶，过0.22μm亲水PTFE滤膜，上机测试。

标准工作曲线： 称取空白基质2g共6份于50mL离心管中，分别加入适量二甲基黄和二乙基黄混合中间溶液（100ng/mL）40μL、80μL，混合中间溶液（400ng/mL） 40μL、80μL、100μL，按照上述“提取、净化、盐析、浓缩与复溶”步骤操作，得到浓度为2ng/mL、4ng/mL、8ng/mL、16ng/mL、20ng/mL的工作曲线。

备注：（1）10mmol/L乙酸铵溶液：称取乙酸铵0.770g，用水溶解并稀释至1000mL。

二、 红2G

提取：准确称取试样2g于50mL离心管中，加入氨水乙醇溶液10mL，涡旋混匀1min，超声10min，10000r/min离心10min，上清液转移至20mL容量瓶中，残渣再加入5mL氨水乙醇溶液重复提取一次，合并两次上清液，用氨水乙醇溶液定容至刻度线，混匀，准确移取10mL提取液60℃氮吹至约1mL，加入10mL 5%甲醇水溶液超声涡旋复溶，做为待净化液。

净化：逗点生物 Copure®合成着色剂WAX专用柱，150mg/6mL（货号：COPWAX6150）

 活化：使用前依次用6mL甲醇、6mL 水进行活化，保持柱体湿润；

上样：全部待净化液过柱，弃去流出液；

淋洗：依次用6mL水和6mL甲醇淋洗小柱，弃去流出液；

洗脱：用10mL 2%氨化甲醇分2次洗脱，收集洗脱液；

氮吹复溶：将洗脱液于40℃下氮吹至近干，精密加入1mL 乙酸铵（10mmol/L）：乙腈=1：1溶液复溶，过0.22μm亲水PTFE滤膜，上机测试。

标准工作曲线： 称取空白基质2g共6份于50mL离心管中，分别加入适量红2G中间溶液（1μg/mL）50μL、100μL，混合中间溶液（5μg/mL）40μL、80μL、100μL，按照上述“提取、净化、浓缩与复溶”步骤操作，得到浓度为25ng/mL、50ng/mL、100ng/mL、200ng/mL、250ng/mL的工作曲线。

说明：（1）氨水乙醇溶液：量取氨水20mL，无水乙醇70mL，用水稀释至1000mL。

（2）建议验证滤膜对红2G，二甲基黄和二乙基黄的吸附情况。

二、仪器条件

2.1二甲基黄和二乙基黄色谱参考条件

2.1.1液相色谱条件

仪器：仪器：UPLC-MS/MS（Thermo Fisher TSQ Endura）

色谱柱：逗点生物 Commasil® AQ-C18色谱柱 3.0mm×150mm,1.8μm（货号：HAQC18422）；

流动相：A：10mmol乙酸铵水溶液（含0.1%甲酸）    B：乙腈

洗脱方式：梯度洗脱，见表1；柱温：40℃

表 1 梯度洗脱程序

2.1.2 质谱参考条件

离子源：HESI ，电喷雾电压：3500 V ；

鞘气压力：40 arb ，辅气压力：8 arb  ；    

离子传输管：300 ℃ ，辅气温度：300 ℃ 。

表2 组分名称及离子一览表

2.2 红2G色谱参考条件

2.2.1液相色谱参考条件

仪器：仪器：UPLC-MS/MS（Thermo Fisher TSQ Endura）

色谱柱：逗点生物 Commasil® AQ-C18色谱柱 3.0mm×150mm,1.8μm（货号：HAQC18422）；

流动相：A：10mmol乙酸铵水溶液    B：乙腈

洗脱方式：梯度洗脱，见表2；柱温：40℃

表 3 梯度洗脱程序

2.2.2 质谱参考条件

离子源：HESI ，电喷雾电压：3500 V ；

鞘气压力：40 arb ，辅气压力：8 arb  ；    

离子传输管：300 ℃ ，辅气温度：300 ℃ 。

表4 组分名称及离子一览表

三、实验结果

3.1样品加标结果表

表5 豆皮基质二甲基黄、二乙基黄加标实验结果表

表6 腊肠基质二甲基黄、二乙基黄加标实验结果表

表7腊肠基质红2G加标实验结果表

3.2 色谱图

图1 曲线点为2 ng/mL的二甲基黄离子提取色谱图

图2 腊肠（本底）中二甲基黄离子提取色谱图

图3 添加浓度为2μg/kg腊肠中二甲基黄离子提取色谱图

图4 添加浓度为16μg/kg腊肠中二甲基黄离子提取色谱图

图5 豆皮（本底）中二甲基黄离子提取色谱图

图6 添加浓度为2μg/kg豆皮中二甲基黄离子提取色谱图

图7 添加浓度为16μg/kg豆皮中二甲基黄离子提取色谱图

图8 曲线点为2 ng/mL的二乙基黄离子提取色谱图

图9 腊肠（本底）中二乙基黄离子提取色谱图

图10 添加浓度为2μg/kg腊肠中二乙基黄离子提取色谱图

图11 添加浓度为16μg/kg腊肠中二乙基黄离子提取色谱图

图12 豆皮（本底）中二乙基黄离子提取色谱图

图13 添加浓度为2μg/kg豆皮中二乙基黄离子提取色谱图

图14 添加浓度为16μg/kg豆皮中二乙基黄离子提取色谱图

图15 曲线点为2 ng/mL的红2G离子提取色谱图

图16 腊肠（本底）中红2G离子提取色谱图

图17 添加浓度为25μg/kg腊肠中红2G离子提取色谱图

图18 添加浓度为100μg/kg腊肠中红2G离子提取色谱图

四、订购信息