辣椒粉、辣椒油和辣椒酱中的苏丹红检测的固相萃取方法（逗点生物 Copure® 苏丹红分子印迹柱 )
- 2026-06-15 11:18:17
- 逗点生物
辣椒粉、辣椒油和辣椒酱中的苏丹红（逗点生物 Copure® 苏丹红分子印迹柱 )
在依据标准 《GB/T 19681-2005 食品中苏丹红染料的检测方法 高效液相色谱法》检测苏丹红时，用中性氧化铝固相萃取小柱进行样品净化，存在柱性能稳定性差的问题，同时处理辣椒酱等复杂基质样品存在干扰。针对上述技术问题，逗点生物推出了改良版的苏丹红分子印迹固相萃取柱，柱性能稳定性高，同时优化了样品前处理流程。
一、标准溶液的配制
1.1 苏丹红标准中间溶液（100μg/mL）：吸取1mL苏丹红标准储备液（1000μg/mL），用正己烷定容至10mL。
1.2 苏丹红标准中间溶液（10μg/mL）：吸取1mL苏丹红标准储备液（100μg/mL），用正己烷定容至10mL。
1.3 苏丹红标准中间溶液（10μg/mL）：吸取0.1mL苏丹红标准储备液（1000μg/mL），用乙腈定容至10mL。
注：1.1和1.2标准中间溶液用于样品加标；1.3标准中间溶液用于曲线配制。
二、样品前处理
2.1 样品提取
2.1.1 辣椒油
称0.5g辣椒油，加入5mL正己烷溶解，待净化。
2.1.2 辣椒粉
称1g辣椒粉，加入20mL正己烷，涡旋10min，超声5min，4000转/5min，移取上清液；残渣用10mL正己烷重复提取1次，合并2次正己烷上清液，40℃氮吹至5mL以下，涡旋均匀待净化。
2.1.3 辣椒酱
称取5g均匀样品于50mL离心管中，加入5g无水硫酸钠，加入20mL正己烷，振荡提取10min，4000r/min离心5min，转移正己烷层，下层用20mL正己烷重复提取，10000r/min离心5min，合并所有正己烷层， 40℃氮吹干，加入5mL正己烷复溶完全后作为待净化液。
2.2 样品净化（COMIPSD-PLUS01—适用于辣椒油、辣椒粉基质；COMIPSD-PLUS02—适用于辣椒酱基质）
活化 10mL正己烷，弃去；
上样 全部待净化液过柱，弃去；
淋洗 5mL正己烷，弃去；
洗脱 15mL 30%乙酸乙酯正己烷分3次洗脱，收集洗脱液。
氮吹复溶：洗脱液40℃氮吹干，加入5mL丙酮复溶，过亲水PTFE滤膜。
2.3 标准系列工作液
吸取适量中间液，用乙腈逐级稀释，得到浓度为0.02μg/mL、0.05μg/mL、0.1μg/mL、0.2μg/mL、0.5μg/mL、1μg/mL、2μg/mL。根据样品浓度选择至少5个点建立校准曲线。
注：1）洗脱液建议分次洗脱；
2）复溶液尽量选择丙酮，不要用乙腈，会出现复溶不完全的情况；
3）标曲配置建议用乙腈配置，用正己烷和丙酮配置曲线时，苏丹红峰形可能会出现异常。
三、仪器条件
仪器：ThermoFisher U3000液相色谱仪
色谱柱：CommaSil®C18 (4.6 mm×250 mm，5μm)
流动相：A：0.02%磷酸水；B：乙腈
洗脱方式：A：B=5:95 等度洗脱
流速：1 mL/min，柱温：30 ℃，进样量：20μL
检测器：紫外检测器，检测波长：478 nm（苏丹红Ⅰ）、520nm（苏丹红Ⅱ、苏丹红Ⅲ、苏丹红Ⅳ）
四、实验结果
4.1实验结果
表1 辣椒粉中苏丹红的添加回收结果
项目 |
添加浓度： 0.04μg/mL |
添加浓度：1μg/mL |
||
回收率(%) |
平均回收率(%) |
回收率(%) |
平均回收率(%) |
|
苏丹红Ⅰ |
78.5 |
79.5 |
86.9 |
88.9 |
80.5 |
90.8 |
|||
苏丹红Ⅱ |
91 |
92.4 |
88.4 |
90.2 |
93.8 |
92 |
|||
苏丹红Ⅲ |
85.3 |
87.8 |
90.1 |
92.4 |
90.3 |
94.6 |
|||
苏丹红Ⅳ |
109.8 |
108.9 |
90.3 |
92.3 |
108 |
94.3 |
|||
表2 辣椒油中苏丹红的添加回收结果
项目 |
添加浓度： 0.04μg/mL |
添加浓度：1μg/mL |
||
回收率(%) |
平均回收率(%) |
回收率(%) |
平均回收率(%) |
|
苏丹红Ⅰ |
109 |
106 |
89.5 |
89.6 |
103 |
89.6 |
|||
苏丹红Ⅱ |
105 |
102 |
89.5 |
89.6 |
99 |
89.7 |
|||
苏丹红Ⅲ |
97.8 |
98.9 |
93.4 |
93.5 |
100 |
93.5 |
|||
苏丹红Ⅳ |
109 |
109 |
91 |
91.5 |
109 |
92.1 |
|||
表3 辣椒酱中苏丹红的添加回收结果
项目 |
添加浓度： |
添加浓度：1μg/mL |
||
0.04μg/mL |
||||
回收率(%) |
平均回收率(%) |
回收率(%) |
平均回收率(%) |
|
苏丹红Ⅰ |
92.3 |
90.9 |
89.4 |
89.9 |
89.5 |
90.3 |
|||
苏丹红Ⅱ |
86.0 |
89.7 |
90.2 |
90.7 |
93.3 |
91.2 |
|||
苏丹红Ⅲ |
96.3 |
93.7 |
96.1 |
96.4 |
91.0 |
96.6 |
|||
苏丹红Ⅳ |
82.8 |
81.7 |
90.6 |
90.2 |
80.5 |
89.8 |
|||
图1 加标浓度为0.04μg/mL时辣椒粉中苏丹红液相色谱图
图2 加标浓度为1μg/mL时辣椒粉中苏丹红液相色谱图
图3 加标浓度为0.04μg/mL时辣椒油中苏丹红液相色谱图
图4 加标浓度为1μg/mL时辣椒油中苏丹红液相色谱图
图5 加标浓度为0.04μg/mL时辣椒酱中苏丹红液相色谱图
图6 加标浓度为1μg/mL时辣椒酱中苏丹红液相色谱图
五、订购信息
货号 |
描述 |
包装 |
COMIPSD-PLUS01 |
Copure®苏丹红分子印迹柱01（适用辣椒油、辣椒粉基质） |
20支/盒 |
COMIPSD-PLUS02 |
Copure®苏丹红分子印迹柱02（适用辣椒酱基质） |
20支/盒 |
HC18536 |
CommaSil®C18 (4.6 mm×250 mm，5μm) |
1支/盒 |
BN24 |
智能水浴氮吹仪 |
1台/箱 |
SDC-4000-D |
biocomma® 多管涡旋混匀仪，标配15mL/50mL通用适配器 |
1台/箱 |
ASF130-22-PTFE |
PTFE针式过滤器/Ф13 mm/0.22 μm/ 有机系 |
100个/盒 |
SC2-1 |
2 mL蓝色聚丙烯盖，白色PTFE/红色硅胶垫，9-425 |
100个/盒 |
V2-AL-N |
2 mL螺纹棕色样品瓶，带书写处11.6*32 mm，9-425 |
100个/盒 |
