《中国药典》无菌检查法培养基保存要求解析

无菌检查是药品、生物制品及医疗器械微生物质量控制的重要项目，而培养基质量则直接影响无菌检查结果的准确性和可靠性。随着《中国药典（2025版）》的实施，对于无菌检查用培养基的保存要求也进行了进一步规范。

新版药典规定：配制完成的培养基如不立即使用，应置于密闭容器中，在2～25℃条件下保存，并在经验证的有效期内使用。 相较于旧版药典中“一般可保存一个月”的表述，新版更强调通过稳定性验证确定培养基实际效期。这是因为培养基的保存期限受到配方组成、灭菌工艺、包装方式及储存环境等多种因素影响，不同培养基之间存在明显差异。

胰酪大豆胨液体培养基（TSB）的保存特点

胰酪大豆胨液体培养基（TSB）是无菌检查中最常用的培养基之一，其配方相对稳定，通常采用高压蒸汽灭菌或过滤除菌两种工艺制备。

在高压灭菌过程中，培养基中的糖类可能发生轻微降解或美拉德反应，同时部分热敏性维生素成分也会受到影响。因此，相较于高压灭菌产品，采用过滤除菌工艺制备的TSB通常具有更好的长期稳定性。

长期储存过程中，TSB常见的变化包括：

• 培养基颜色逐渐加深；

• pH值缓慢下降；

• 部分营养成分发生氧化或降解。

为提高稳定性，应尽量采用密闭容器储存，减少空气残留量，并避免光照。研究和实践经验表明，培养基容器内空气越少，其稳定性通常越好；必要时可采用氮气保护以降低氧化风险。

需要注意的是，TSB一般不建议冷冻保存。虽然冷冻后可能出现颜色不均匀现象，但在解冻并恢复均一后，其理化指标和微生物促生长性能通常不会受到明显影响。不过，频繁冻融仍可能增加质量波动风险，因此不作为常规保存方式推荐。

硫乙醇酸盐流体培养基（FTM）保存要求更严格

与TSB相比，硫乙醇酸盐流体培养基（FTM）的稳定性要求更高。

FTM中含有少量琼脂和硫乙醇酸钠等还原性成分，无法采用过滤除菌工艺，通常只能通过高压蒸汽灭菌制备。同时，该培养基含有较多碳源成分，且缓冲能力相对较弱，储存期间pH下降速度通常快于TSB。

此外，FTM最重要的风险来自氧化作用。培养基中的还原环境一旦被破坏，将直接影响厌氧菌和微需氧菌的检出能力。

因此，FTM保存时应重点关注以下因素：

• 采用密封性能良好的玻璃容器；

• 减少容器内空气空间；

• 必要时采用氮气置换保护；

• 避免长期暴露于光照环境。

特别需要强调的是，FTM禁止冷冻保存。由于培养基中含有少量琼脂，冷冻会破坏其胶体结构，使氧更容易渗入培养基内部，从而降低培养基的还原能力和培养性能。

胰酪大豆胨琼脂培养基（TSA）保存重点在于失水控制

对于胰酪大豆胨琼脂培养基（TSA）平板而言，保存期间最主要的问题并非化学稳定性，而是水分平衡。

平板在储存过程中会持续缓慢失水，导致培养基表面干裂、接种性能下降；而温度波动过大时，又可能产生冷凝水，影响菌落生长观察和检测结果。

虽然药典允许在2～25℃范围内保存，但从实际应用角度来看，15～25℃环境通常更有利于维持培养基质量。

保存过程中应注意：

• 使用密封包装或密闭容器储存；

• 避免频繁冷热交替；

• 防止培养基表面干燥或形成大量冷凝水。

采用密闭培养基瓶或密封包装保存时，TSA通常能够维持数月以上的稳定性。

对于含琼脂培养基，同样不建议冷冻保存，因为冻结和解冻过程会破坏凝胶结构，影响培养基质量。

沙氏培养基与马铃薯葡萄糖琼脂培养基的稳定性

真菌培养基如：

• 沙氏葡萄糖琼脂培养基（SDA）

• 沙氏葡萄糖液体培养基（SDB）

• 马铃薯葡萄糖琼脂培养基（PDA）

均含有较高浓度的葡萄糖。

高糖环境下，培养基在储存期间更容易发生糖类降解和酸化现象，导致pH值逐渐下降。因此，这类培养基通常不适合长期储存。

其中：

• SDB可采用过滤除菌工艺制备，有助于延长保存期；

• SDA和PDA通常需采用高压蒸汽灭菌，其长期稳定性相对较差。

一般实验室建议在制备后1个月内使用，并结合稳定性验证结果确定实际有效期。

稀释液和缓冲液具有较长保存期

无菌检查中常用的：

• 0.1%无菌蛋白胨水

• pH 7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液

由于组成简单，不含糖类及复杂营养成分，因此具有较好的稳定性。

无论采用高压蒸汽灭菌还是过滤除菌工艺，只要包装密封完好、储存条件适宜，其理化性质变化极小，保存期限通常远长于常规培养基。在经过充分稳定性验证后，部分产品甚至可实现数年的保存期。

培养基保存的关键原则

从培养基稳定性研究结果来看，影响培养基保存期限的主要因素包括温度、氧化、光照和失水四个方面。

对于无菌检查用培养基而言，保存过程中应遵循以下原则：

✓ 密闭保存，减少空气接触；

✓ 避免阳光直射和长时间灯光照射；

✓ 控制适宜储存温度（2～25℃）；

✓ 避免频繁冷热循环；

✓ 含琼脂培养基禁止冷冻保存；

✓ 通过稳定性研究确定实际有效期。

《中国药典（2025版）》取消统一保存期限要求，改为“经验证效期内使用”，体现了培养基质量管理从经验判断向科学验证转变的趋势。对于培养基生产企业和使用实验室而言，建立完善的稳定性评价体系，才能确保无菌检查结果的准确可靠。