亮绿乳糖胆盐培养液：饮用天然矿泉水中大肠菌群检测的选择性发酵培养基

亮绿乳糖胆盐培养液，英文名称为 Brilliant Green Bile Broth，是一种用于饮用天然矿泉水中大肠菌群检测的选择性液体发酵培养基。大肠菌群是评价饮用水卫生质量的重要指示菌群，其检出提示水源、生产环境、灌装过程或包装环节可能存在粪便污染或卫生控制不足风险。在 GB 8538-2022《食品安全国家标准 饮用天然矿泉水检验方法》中，大肠菌群是饮用天然矿泉水微生物检验的重要项目之一。

本产品货号为 GF1009，规格 250 g/瓶，保质期 三年。与固体平板培养基不同，亮绿乳糖胆盐培养液通常分装于带玻璃小倒管的试管中，通过观察培养液浑浊和小倒管内产气情况，判断乳糖发酵产气菌的生长表现。

产品信息

培养基配方

检验原理

亮绿乳糖胆盐培养液的检测原理可概括为 选择性抑制+乳糖发酵产气。蛋白胨为微生物提供生长所需的基础营养，乳糖作为可发酵碳源，用于观察大肠菌群是否能够发酵乳糖并产生气体。若目标菌在培养基中生长并发酵乳糖，培养液会出现浑浊，小倒管内可见气体。

牛胆盐和亮绿是培养基中的选择性成分。牛胆盐可抑制多数革兰氏阳性菌，并模拟肠道胆盐环境；亮绿是一种抑菌性染料，可进一步抑制部分非目标菌。二者协同作用，有助于提高大肠菌群检测的选择性。

需要注意的是，该培养基阳性结果表示样品中存在能够在规定条件下生长并发酵乳糖产气的可疑大肠菌群，并不等同于直接完成菌种鉴定。正式检测应按照 GB 8538-2022 的完整流程进行结果判定。

使用方法

称取本品 22.0 g，加入蒸馏水或去离子水 1 L，搅拌加热至完全溶解。分装至装有玻璃小倒管的试管中，每管 10 mL，于 115℃高压灭菌20 min。

制备时应注意小倒管状态。小倒管应洁净、完整，倒置置于试管内，灭菌后不应残留明显气泡。若使用前发现小倒管内已有气泡，可能影响产气结果判读，应排除气泡或弃用该管。培养液应澄清、颜色正常，无污染、沉淀或异常浑浊。

与常规121℃灭菌条件不同，本产品使用方法规定为 115℃高压灭菌20 min，应按标签方法执行，避免过度热处理影响亮绿、胆盐体系和乳糖发酵反应。

质量控制

下列质控菌株接种待测试培养基后，于 35℃～37℃培养24 h，结果应符合要求。

大肠埃希氏菌、弗氏柠檬酸杆菌和产气肠杆菌均可作为大肠菌群相关阳性质控菌株，应表现为明显浑浊并产气。粪肠球菌为革兰氏阳性菌，应受到胆盐和亮绿抑制，不应生长。

鼠伤寒沙门氏菌可生长浑浊，但通常不发酵乳糖产气，因此可用于提示该培养基并非仅凭“浑浊”判定大肠菌群阳性。判读时必须同时观察生长情况和小倒管产气情况。

结果判读要点

亮绿乳糖胆盐培养液判读时，应同时关注 培养液浑浊度 和 小倒管内气体。典型阳性表现为培养液明显浑浊，小倒管中有气体，且气体量达到标准或质控要求。仅有浑浊但无产气，不能简单判为典型大肠菌群阳性；小倒管内存在少量可疑气泡时，也应排除灭菌前后残留气泡、振荡造成气泡或操作误差。

对于饮用天然矿泉水这类低菌量样品，检测结果受采样、样品保存、接种量、培养温度、培养时间和小倒管状态影响较大。实验室应严格按照标准方法进行操作，并保留阳性、阴性和必要的培养基质控记录。

常见问题与控制建议

若阳性质控菌株不产气，应检查培养基配制量、乳糖质量、pH、灭菌温度、灭菌时间、小倒管状态和菌株活力。过度加热可能影响乳糖和选择性成分，pH偏差也可能影响发酵产气。

若粪肠球菌出现明显生长，说明选择性不足，应检查牛胆盐和亮绿的质量、称量准确性、干粉是否吸潮以及培养基是否配制过稀。若鼠伤寒沙门氏菌出现浑浊但无产气，应按非典型大肠菌群阳性处理，不宜将“浑浊”单独作为阳性依据。

干粉培养基使用后应立即密封，避光、干燥保存，防止吸潮结块。称量时应注意粉尘防护，建议佩戴口罩并避免吸入粉尘。本品不得用于临床检验，仅适用于规定范围内的微生物检测。

总结

亮绿乳糖胆盐培养液（Brilliant Green Bile Broth）是饮用天然矿泉水中大肠菌群检测的重要选择性液体培养基。其通过蛋白胨提供基础营养，以乳糖作为发酵底物，并利用牛胆盐和亮绿抑制多数非目标菌。目标菌若能在培养基中生长并发酵乳糖产气，则表现为培养液浑浊和小倒管内产气。

本产品按 22.0 g/L 配制，并采用 115℃高压灭菌20 min。质量控制中，大肠埃希氏菌、弗氏柠檬酸杆菌和产气肠杆菌应表现为浑浊并产气，粪肠球菌应不生长，鼠伤寒沙门氏菌可用于提示“浑浊不等于典型阳性”。只有在配制、分装、小倒管、灭菌、培养和判读均受控的情况下，亮绿乳糖胆盐培养液才能为饮用天然矿泉水大肠菌群检测提供可靠结果。