三糖铁琼脂（TSI）：沙门氏菌等肠道革兰氏阴性杆菌鉴定中的经典生化培养基
- 2026-06-18 15:14:23
- 逗点生物
三糖铁琼脂（TSI）：沙门氏菌等肠道革兰氏阴性杆菌鉴定中的经典生化培养基
产品信息
| 项目 | 内容 |
|---|---|
| 产品名称 | 三糖铁琼脂 |
| 英文名称 | Triple Sugar Iron Agar |
| 简称 | TSI |
| 产品货号 | GF1012 |
| 产品规格 | 250 g/瓶 |
| 保质期 | 三年 |
| 产品用途 | 用于沙门氏菌等肠杆菌科及相关革兰氏阴性杆菌的生化鉴定 |
| 配制量 | 63.4 g/L |
| 培养基形式 | 高层斜面 |
| 最终pH（25℃） | 7.4±0.2 |
培养基配方
| 成分 | 含量（g/L） | 主要作用 |
|---|---|---|
| 蛋白胨 | 20.0 | 提供氮源、氨基酸、小肽及基础营养 |
| 牛肉浸粉 | 5.0 | 提供维生素、矿物质和生长因子 |
| 乳糖 | 10.0 | 发酵糖，用于观察乳糖利用情况 |
| 蔗糖 | 10.0 | 发酵糖，用于观察蔗糖利用情况 |
| 葡萄糖 | 1.0 | 少量发酵糖，用于区分仅发酵葡萄糖的菌株 |
| 酚红 | 0.025 | pH指示剂，酸性变黄，碱性变红 |
| 氯化钠 | 5.0 | 维持培养基渗透压 |
| 硫酸亚铁铵（含6个结晶水） | 0.2 | 提供铁盐，用于检测硫化氢反应 |
| 硫代硫酸钠 | 0.2 | 硫源，可被部分细菌还原产生硫化氢 |
| 琼脂 | 12.0 | 凝固剂，形成半固体高层斜面 |
| 最终pH（25℃） | 7.4±0.2 | 适合糖发酵、产气和硫化氢反应观察 |
检验原理
TSI 的核心原理是通过 三种糖发酵、产气和硫化氢反应 综合判断细菌的生化特征。培养基中含有葡萄糖、乳糖和蔗糖，其中葡萄糖浓度较低，乳糖和蔗糖浓度较高。不同细菌对这三种糖的利用能力不同，因此会在斜面和高层部分形成不同颜色变化。
酚红是培养基中的酸碱指示剂。细菌发酵糖类产酸时，培养基变黄，记为 A；若细菌利用蛋白胨产生碱性代谢产物，培养基变红，记为 K。由于斜面部分接触氧气较多，而高层底部相对缺氧，同一菌株在斜面和高层中可能表现出不同反应。
只能发酵葡萄糖的细菌，早期可使斜面和高层均变黄；但由于葡萄糖含量较低，斜面部分产生的少量酸会被氧化，同时细菌利用蛋白胨产生碱性物质，使斜面重新变红，而高层因相对厌氧，仍保持黄色，表现为 K/A。沙门氏菌和志贺氏菌常见这类反应。
能够发酵乳糖或蔗糖的细菌会产生较多酸，使斜面和高层均保持黄色，表现为 A/A。大肠埃希氏菌通常表现为 A/A，并可伴随产气。
不发酵糖类的细菌不能利用培养基中的糖产酸，主要利用蛋白胨产生碱性反应，斜面和高层可表现为 K/K 或接近不变。铜绿假单胞菌等非发酵型革兰氏阴性杆菌常见此类反应。
硫化氢与产气反应
TSI 还可用于观察硫化氢和气体产生。部分细菌可还原硫代硫酸钠或代谢含硫化合物，产生硫化氢。硫化氢与硫酸亚铁铵中的铁离子反应，生成黑色硫化铁沉淀，因此培养基变黑提示 H₂S 阳性。
产气反应通常表现为高层琼脂中出现气泡、裂隙、琼脂上冲，严重时可见培养基被顶裂或整体移位。产气结果应结合培养时间和菌株特性判断，不能将操作过程中的机械裂缝误判为产气。
需要注意的是，若高层底部大量变黑，黑色沉淀可能掩盖黄色酸性反应。此时通常仍应理解为高层产酸，即按 K/A，H₂S阳性 判读，而不是简单认为底部“无颜色变化”。
使用方法
称取本品 63.4 g，加入蒸馏水或去离子水 1 L，搅拌加热煮沸至完全溶解，分装试管，于 115℃高压灭菌15 min 后，制成高层斜面备用。
制备高层斜面时，装量和斜面角度要适宜。斜面过长或高层过浅，会影响斜面与高层的氧气差异，进而影响 K/A、A/A 或 K/K 判读；高层过深则可能影响穿刺操作和反应观察。制备完成后，培养基应颜色均一、无污染、无明显气泡、无裂纹和异常沉淀。
接种时应挑取新鲜纯培养物，用接种针先垂直穿刺高层至接近管底，再沿原路退出，并在斜面表面划线。这样的接种方式可同时观察高层相对厌氧环境中的糖发酵、产气和硫化氢反应，以及斜面有氧环境中的糖利用和蛋白胨代谢反应。
质量控制
接种下列质控菌株后，于 36℃±1℃需氧培养24 h，观察结果。若标准或实验室SOP另有要求，可按规定延长观察，但发布和记录中应避免出现“24 h”和“48 h”混杂不清的表述。
| 质控指标 | 质控菌株及编号 | 质控评定标准 |
|---|---|---|
| 生化特性 | 大肠埃希氏菌 ATCC 25922 | 生长良好，A/A；产气；不产硫化氢 |
| 生化特性 | 肠炎沙门氏菌 CMCC(B)50335 | 生长良好，K/A；产气；产硫化氢 |
| 生化特性 | 福氏志贺氏菌 CMCC(B)51572 | 生长良好，K/A；不产气；不产硫化氢 |
| 生化特性 | 铜绿假单胞菌 ATCC 27853 | 生长良好，K/K；不产气；不产硫化氢 |
注：A 表示产酸，培养基变黄；K 表示产碱，培养基变红。结果通常按“斜面/高层”顺序记录，例如 K/A 表示斜面产碱、高层产酸。
典型反应判读
TSI 的结果判读应综合观察斜面颜色、高层颜色、产气和黑色沉淀。常见判读方式如下：
| 反应类型 | 表现 | 常见意义 |
|---|---|---|
| A/A | 斜面黄，高层黄 | 发酵葡萄糖，并发酵乳糖和/或蔗糖 |
| K/A | 斜面红，高层黄 | 仅发酵葡萄糖，不发酵乳糖和蔗糖 |
| K/K | 斜面红，高层红或不变 | 不发酵糖类，主要利用蛋白胨 |
| H₂S阳性 | 高层或穿刺线附近变黑 | 产生硫化氢，与铁盐生成黑色硫化铁 |
| 产气阳性 | 琼脂裂开、气泡、上冲 | 糖发酵过程中产生气体 |
TSI 结果只是细菌鉴定的一部分。沙门氏菌常见 K/A、H₂S阳性，可产气；志贺氏菌多为 K/A、不产气、不产硫化氢；大肠埃希氏菌多为 A/A、产气、不产硫化氢。但不同菌株可能存在非典型反应，实际判定应结合赖氨酸脱羧酶、尿素酶、靛基质、氧化酶、血清学或分子方法等后续鉴定结果。
常见问题与控制建议
若斜面和高层颜色不典型，应首先检查接种方式是否正确。TSI 必须采用“高层穿刺+斜面划线”的方式，若只划线不穿刺，就无法准确观察高层反应、产气和硫化氢；若穿刺偏斜或未接近管底，也可能影响高层结果。
若培养时间过长，斜面可能因蛋白胨利用而进一步碱化，导致结果偏向红色；若培养时间过短，则糖发酵或硫化氢反应可能不充分。因此，应按规定时间观察并记录结果。质控结果异常时，应检查培养基配制量、pH、灭菌条件、斜面制备状态、菌株活力和培养箱温度。
若H₂S反应过强导致底部颜色难以辨认，应结合黑色沉淀部位和斜面颜色综合判断。若培养基出现干裂、气泡过多、颜色异常或污染，应停止使用。
干粉产品应密封、避光、干燥保存，防止吸潮结块。制备后的TSI斜面应按实验室SOP保存，并在经验证的有效期内使用。使用前应检查斜面是否完整、高层是否有裂缝、颜色是否正常、是否存在污染或失水。
总结
三糖铁琼脂（TSI）是一种用于肠杆菌科及相关革兰氏阴性杆菌生化鉴定的经典培养基。其通过葡萄糖、乳糖和蔗糖观察糖发酵反应，以酚红显示酸碱变化，并利用硫代硫酸钠和硫酸亚铁铵检测硫化氢生成，同时还可观察产气情况。
本产品按 63.4 g/L 配制，采用 115℃高压灭菌15 min，制成高层斜面使用。质量控制中，大肠埃希氏菌应表现为 A/A、产气、不产硫化氢；肠炎沙门氏菌应表现为 K/A、产气、产硫化氢；福氏志贺氏菌应表现为 K/A、不产气、不产硫化氢；铜绿假单胞菌应表现为 K/K、不产气、不产硫化氢。只有在配方、制备、接种、培养和判读均规范的情况下，TSI 才能为沙门氏菌等肠道细菌的鉴定提供可靠的生化依据。
