PALCAM 琼脂基础：单核细胞增生李斯特氏菌选择性分离培养基

产品基本信息

配方组成、用量、作用及用途

检验原理

PALCAM 琼脂的核心原理包括选择性抑菌、七叶苷水解显色和甘露醇发酵鉴别。

选择性方面，基础培养基中的氯化锂可抑制许多革兰氏阴性菌和部分背景菌；配套选择性试剂中的抗生素进一步增强抑菌能力，使李斯特氏菌在复杂样品中更容易形成可观察菌落。由于不同厂家配套试剂组成可能略有差异，实际使用应以产品说明书和标准方法要求为准。

鉴别方面，李斯特氏菌可水解七叶苷，生成七叶亭。七叶亭与柠檬酸铁铵提供的铁离子反应，可形成黑色或棕黑色复合物，使菌落中心或周围培养基变黑。与此同时，培养基中含有甘露醇和酚红，若背景菌发酵甘露醇产酸，培养基局部会由红色转为黄色；而典型单核细胞增生李斯特氏菌通常表现为不发酵甘露醇，菌落周围不形成明显黄色区。

因此，典型疑似李斯特氏菌菌落常表现为灰绿色、橄榄绿色或灰绿色菌落，中心凹陷或中心发黑，周围可见黑色晕圈。但平板菌落特征只能作为初筛依据，最终仍需结合纯化培养、生化鉴定、溶血试验、分子检测或其他确证方法判断。

使用方法

称取本品干粉 73.9 g，加入蒸馏水或去离子水 1 L，搅拌加热煮沸至完全溶解，分装三角瓶后，于 121℃高压灭菌 15 min。灭菌后冷却至约 50℃，每 100 mL 基础培养基加入 1 支配套试剂 TJ011；也可按说明加入 TJ013、TJ014、TJ015 各 1 支。充分混匀后倾注平板备用。

加入配套选择性试剂后不宜再次高压灭菌。温度过高可能影响抗生素活性，温度过低则容易造成琼脂凝固或添加剂分布不均。配制时应充分混匀，避免局部选择性成分浓度过高或过低，影响目标菌生长和背景菌抑制效果。

典型菌落特征

在 35～37℃培养 48 h 后，典型单核细胞增生李斯特氏菌在 PALCAM 琼脂上通常形成灰绿色至橄榄绿色菌落，中心可凹陷并呈黑色，菌落周围可有黑色晕圈。若背景菌可发酵甘露醇，可能使培养基局部变黄，这类菌落通常不作为典型李斯特氏菌疑似菌落。

需要注意的是，部分非单核细胞增生李斯特氏菌的李斯特氏菌属菌株也可能水解七叶苷并形成类似黑色反应，因此 PALCAM 平板不能单独用于最终鉴定。疑似菌落应进一步转接纯化并进行确证试验。

质量控制

下列质控菌株接种后，于 35～37℃培养 48 h，观察生长和菌落特征。

PR 值用于评价培养基对目标菌的促生长能力。若单核细胞增生李斯特氏菌生长率偏低，应检查基础培养基称量、灭菌条件、pH、配套选择性试剂加入温度、试剂活性、平板储存时间和菌株状态。若大肠埃希氏菌或粪肠球菌生长明显，则可能提示氯化锂或配套抗生素选择性不足、添加剂失效、添加量错误或储存条件不当。

使用注意事项

PALCAM 琼脂基础需加入配套选择性试剂后使用。基础培养基灭菌后应冷却至约 50℃再加入试剂，并充分混匀后倾注平板。加入选择性试剂后的培养基不应再次高压灭菌，也不宜长时间高温保温。

制备好的平板应颜色均匀、表面平整，无污染、无明显气泡、无干裂或大量析水。由于培养基含有七叶苷-铁盐显色系统，储存和培养过程中颜色可能受光照、温度和时间影响，因此平板应避光、冷藏，并在验证有效期内使用。

在结果判读时，应将灰绿色、中心发黑并伴黑色晕圈的菌落作为疑似李斯特氏菌菌落进行挑取，但不能仅凭 PALCAM 平板形态判定为单核细胞增生李斯特氏菌。后续仍需按照相关标准方法进行纯化、溶血、生化或分子确证。

总体而言，PALCAM 琼脂基础通过丰富营养、氯化锂和抗生素选择性抑菌、七叶苷水解显黑以及甘露醇发酵鉴别等多重机制，可有效用于单核细胞增生李斯特氏菌的选择性分离培养，是李斯特氏菌检测流程中常用的重要选择性鉴别培养基之一。