月桂基硫酸盐胰蛋白胨-MUG(LST-MUG):大肠埃希氏菌与 O157/NM 鉴别试验培养基

2026-06-18 17:25:38
逗点生物
简介

月桂基硫酸盐胰蛋白胨-MUG(LST-MUG):大肠埃希氏菌与 O157:H7/NM 鉴别试验培养基

产品基本信息

项目 内容
产品名称 月桂基硫酸盐胰蛋白胨-MUG(LST-MUG)
英文名称 Lauryl Sulfate Tryptose Broth with MUG
产品货号 GF1038
包装规格 1000 mL/瓶,具体规格以产品标签为准
产品用途 用于大肠埃希氏菌 β-葡萄糖醛酸苷酶反应的鉴别性试验,可辅助鉴别 O157:H7/NM 等 MUG 阴性菌株
保质期 三年

配方组成、用量、作用及用途

成分 用量(g/L) 主要作用 用途说明
胰蛋白胨 20.0 提供氮源、氨基酸、短肽和生长因子 支持大肠菌群和大肠埃希氏菌生长
氯化钠 5.0 维持渗透压 保持细菌细胞正常生理状态,使培养体系稳定
乳糖 5.0 可发酵糖类 作为大肠菌群发酵产酸、产气的底物,配合倒置小导管观察产气
磷酸氢二钾 2.75 缓冲盐组分 与磷酸二氢钾共同维持 pH 稳定,减少发酵产酸造成的剧烈波动
磷酸二氢钾 2.75 缓冲盐组分 维持适宜的酸碱环境,有利于细菌生长和酶反应稳定
月桂基硫酸钠 0.1 选择性抑制剂 抑制部分非大肠菌群细菌,增强对大肠菌群的选择性
MUG 0.1 β-葡萄糖醛酸苷酶荧光底物 被 MUG 阳性大肠埃希氏菌水解释放 4-甲基伞形酮,在 366 nm 紫外灯下呈蓝白色荧光
最终 pH(25℃) 6.8 ± 0.2 提供适宜生长和酶反应环境 保证乳糖发酵、产气和 MUG 荧光反应稳定表现

检验原理

LST-MUG 的鉴别原理主要来自 乳糖发酵产气MUG 荧光反应

大肠菌群通常能够发酵乳糖并产生气体,因此培养基常分装于带倒置小导管的试管中。培养后如肉汤浑浊并且小导管中出现气体,提示存在乳糖发酵产气菌。月桂基硫酸钠则对部分非目标菌具有抑制作用,有助于提高大肠菌群检测的选择性。

MUG 的全称为 4-甲基伞形酮-β-D-葡萄糖醛酸苷。多数普通大肠埃希氏菌具有 β-葡萄糖醛酸苷酶,可水解 MUG 的 β-葡萄糖醛酸苷键,释放 4-甲基伞形酮。该产物在 366 nm 紫外灯下可产生蓝白色荧光,因此荧光阳性通常支持大肠埃希氏菌存在。

但典型大肠埃希氏菌 O157:H7 通常不具有 β-葡萄糖醛酸苷酶活性,因此多表现为 MUG 阴性、无荧光。也正因如此,LST-MUG 可用于辅助区分普通大肠埃希氏菌和 O157:H7/NM 等特殊菌株。需要强调的是,少数非大肠埃希氏菌也可能出现 MUG 阳性,少数大肠埃希氏菌也可能表现异常,因此荧光结果必须结合后续分离培养和确证试验综合判断。

使用方法

称取本品 35.7 g,加入蒸馏水或去离子水 1 L,搅拌加热煮沸至完全溶解,分装于带有倒置小导管的试管中,于 121℃高压灭菌 15 min,冷却后备用。

分装时应确保倒置小导管内无残留气泡,否则会影响产气判读。灭菌后培养基应澄清或基本澄清,无污染、异常沉淀或明显颜色异常。使用前应检查小导管状态,若小导管内已有气泡且无法排除,不宜用于正式试验。

典型结果判读

36℃培养 24 h 后,可从生长、产气和荧光三个方面观察结果。

观察项目 典型表现 判读意义
肉汤浑浊 培养液由澄清变浑浊 提示细菌生长
倒置小导管产气 小导管内有气体积聚 提示乳糖发酵产气菌存在
366 nm 紫外灯下荧光 蓝白色荧光 常提示 β-葡萄糖醛酸苷酶阳性,大多数普通大肠埃希氏菌呈阳性
无荧光 紫外灯下不产生蓝白色荧光 可能为 O157:H7/NM 等 MUG 阴性菌株,也可能为其他 MUG 阴性菌,需进一步确证

对于 O157:H7/NM 的鉴别,应重点关注“产气但无荧光”的可疑结果,并进一步转接至 CT-SMAC、改良山梨醇麦康凯琼脂或其他适用选择性分离培养基进行分离鉴定。仅凭无荧光结果不能判定为 O157:H7/NM 阳性。

质量控制

下列质控菌株接种待测试培养基后,于 36℃培养 24 h,观察 MUG 荧光反应。

指标 质控菌株及编号 质控评定标准
生化特性 大肠埃希氏菌 ATCC 25922 阳性,有蓝白色荧光
生化特性 大肠埃希氏菌 O157:H7 CMCC(B)44939 阴性,无荧光

大肠埃希氏菌 ATCC 25922 应表现为 MUG 阳性,说明培养基中 MUG 底物和酶反应体系正常。大肠埃希氏菌 O157:H7 CMCC(B)44939 应表现为 MUG 阴性,可用于验证该培养基对 O157:H7 典型酶反应特征的鉴别能力。

若 ATCC 25922 无荧光,应检查培养基配制浓度、灭菌条件、MUG 稳定性、紫外灯波长、观察环境、培养时间和菌株活性。若 O157:H7 出现明显荧光,则应排查菌株真实性、交叉污染、培养基批次或判读条件是否存在问题。

使用注意事项

LST-MUG 属于鉴别性液体培养基,不能单独作为致病性大肠杆菌或 O157:H7/NM 的最终确认依据。荧光阳性常提示 β-葡萄糖醛酸苷酶阳性大肠埃希氏菌,荧光阴性则可提示 O157:H7/NM 等特殊菌株的可能性,但最终结果仍需结合选择性分离培养、生化鉴定、血清学试验或分子检测。

观察荧光时应使用 366 nm 紫外灯,并尽量在较暗环境下判读。培养基本身、样品基质或容器材料有时可能产生背景荧光,因此应同时设置阳性和阴性对照。操作紫外灯时应避免直视光源,做好眼部和皮肤防护。

干粉培养基使用后应立即密封,置于避光、干燥处保存,避免吸潮、结块或 MUG 底物降解。配制后的培养基应按实验室验证条件保存,并在规定有效期内使用。若出现污染、明显沉淀、颜色异常或小导管异常,不宜用于正式检测。

总体而言,月桂基硫酸盐胰蛋白胨-MUG(LST-MUG)通过乳糖发酵产气、月桂基硫酸钠选择性抑菌和 MUG 荧光反应相结合,可用于大肠埃希氏菌 β-葡萄糖醛酸苷酶活性的鉴别性试验,并可辅助筛选 O157:H7/NM 等 MUG 阴性大肠埃希氏菌,是相关微生物检测流程中常用的鉴别培养基之一。