改良月桂基硫酸胰蛋白胨肉汤-万古霉素（mLST-Vm）：克罗诺杆菌选择性增菌培养基

产品基本信息

配方组成、用量、作用及用途

检验原理

mLST-Vm 的选择性主要来自高盐环境、十二烷基硫酸钠和万古霉素。较高浓度氯化钠可抑制部分对渗透压敏感的微生物；十二烷基硫酸钠，也称月桂基硫酸钠或 SDS，是阴离子表面活性剂，可对部分非目标菌产生抑制作用；万古霉素主要抑制革兰氏阳性菌，尤其可减少粪肠球菌等背景菌对检测的干扰。

克罗诺杆菌属于革兰氏阴性肠杆菌科细菌，对万古霉素通常不敏感，因此可在该选择性体系中生长。胰蛋白胨为其提供氮源和生长因子，乳糖提供碳源，磷酸盐缓冲体系维持适宜 pH，有利于目标菌在增菌阶段恢复和扩增。

需要注意的是，mLST-Vm 仅用于选择性增菌，并不能直接完成克罗诺杆菌的最终鉴定。增菌后应转接至克罗诺杆菌显色培养基或其他标准方法规定的选择性分离培养基，再结合菌落特征、生化鉴定或分子方法进行确证。

使用方法

称取本品 64.6 g，加入蒸馏水或去离子水 1 L，搅拌加热至完全溶解，于 121℃高压灭菌 15 min。灭菌后冷却至 50℃以下，按每 100 mL 培养基加入 1 支配套试剂 TJ012，混合均匀，并建议在 24 h 内使用。

万古霉素为选择性抗菌成分，不宜随基础培养基一起高压灭菌。加入时培养基温度应控制在 50℃以下，以减少药物活性损失；加入后应充分混匀，避免局部浓度不均影响目标菌生长或选择性效果。

典型应用

mLST-Vm 主要用于克罗诺杆菌属检测流程中的选择性增菌步骤。样品经前处理或前增菌后，接种至 mLST-Vm 中培养，使目标菌数量增加，同时抑制部分背景菌。增菌液随后转接至克罗诺杆菌显色培养基进行分离观察。

在克罗诺杆菌显色培养基上，典型克罗诺杆菌菌落常表现为蓝绿色或相近特征颜色。但显色结果仅为初筛依据，部分非目标菌可能出现相似颜色，部分目标菌也可能因菌株差异或培养条件影响而表现不典型，因此疑似菌落仍需后续确证。

质量控制

下列质控菌株接种后，于 44±0.5℃培养 24 h，观察增菌效果和选择性表现。

质控中，克罗诺杆菌应在 mLST-Vm 中良好增殖，并在显色培养基上形成符合特征的蓝绿色菌落，说明培养基促生长能力合格。粪肠球菌作为革兰氏阳性受抑制菌株，应受到万古霉素和其他选择性条件的抑制。

若克罗诺杆菌回收不足，应检查培养基称量、溶解、灭菌条件、pH、万古霉素加入温度和剂量、培养温度、菌株活性及接种量。若粪肠球菌生长过多，则可能提示万古霉素失效、添加量不足、培养基配制错误或储存条件不当。

使用注意事项

mLST-Vm 为选择性液体增菌培养基，不能单独作为克罗诺杆菌最终鉴定依据。培养后应及时转接至相应选择性分离培养基，并按照 GB、SN 或企业内控方法完成后续确认。

配套试剂 TJ012 加入后，培养基应在规定时间内使用，避免抗生素活性下降影响选择性。配制过程中应避免过度加热和长时间保温。干粉培养基使用后应立即密封，置于避光、干燥处保存，防止吸潮、结块或成分降解。

若配制后的培养基出现污染、异常沉淀、颜色异常或储存超过验证有效期，不宜用于正式检测。由于本培养基含有较高浓度氯化钠和选择性抑制剂，不适合作为普通细菌通用增菌液，也不适用于对选择压力敏感菌株的复苏培养。

总体而言，改良月桂基硫酸胰蛋白胨肉汤-万古霉素（mLST-Vm）通过营养支持、高盐选择、表面活性剂抑菌和万古霉素抑制革兰氏阳性菌的组合设计，可用于克罗诺杆菌属的选择性增菌培养，是克罗诺杆菌检测流程中重要的选择性增菌培养基。