乳糖发酵培养基：大肠菌群乳糖发酵确证试验常用培养基

产品基本信息

项目	内容
产品名称	乳糖发酵培养基
英文名称	Lactose Fermentation Medium
产品货号	GF1053
产品规格	250 g/瓶
产品用途	用于大肠菌群的乳糖发酵确证试验
参考方法	GB 标准
保质期	三年

成分	用量（g/L）	主要作用	用途说明
蛋白胨	20.0	提供氮源、氨基酸、短肽及部分碳源	支持大肠菌群及相关细菌生长，为发酵反应提供基础营养
乳糖	10.0	可发酵糖类和生化鉴别底物	大肠菌群可发酵乳糖产酸、产气，是确证试验的关键底物
溴甲酚紫	0.01	pH 指示剂	酸性条件下呈黄色，碱性或中性偏碱条件下呈紫色，用于显示乳糖发酵产酸反应
最终 pH（25℃）	7.4 ± 0.2	提供适宜培养和指示剂显色环境	有利于细菌生长、乳糖发酵和产酸产气结果判读

乳糖发酵培养基的判读基础是乳糖发酵产酸和产气。大肠菌群能够利用乳糖进行发酵，产生酸性代谢产物，使培养基 pH 下降。溴甲酚紫在酸性条件下由紫色转为黄色，因此培养基变黄可提示乳糖发酵产酸。

同时，部分大肠菌群在乳糖发酵过程中产生气体。培养基分装时通常加入倒置小导管，培养后若小导管内出现气体，即可作为产气反应的观察依据。典型阳性结果通常表现为培养液混浊、颜色变黄，并且倒置小导管中有气体形成。

需要注意的是，本培养基不含胆盐、抗生素或其他强选择性抑菌剂，因此更准确地说，它是发酵鉴别培养基，而不是强选择性培养基。其作用重点在于确证乳糖发酵能力，而非直接从复杂样品中选择性分离大肠菌群。

称取本品 30.0 g，加入蒸馏水或去离子水 1 L，搅拌加热至完全溶解，分装于带有倒置小导管的试管中，于 115℃高压灭菌 15 min，冷却后备用。

分装时应确保倒置小导管完全浸没于培养液中，灭菌后小导管内不应残留气泡。若小导管中已有气泡，会干扰产气结果判读，应排除气泡后使用；无法排除时不宜用于正式检测。

接种后按标准方法培养，通常从培养液浑浊、颜色变化和倒置小导管产气情况进行判断。

对于大肠菌群确证试验，通常以生长、产酸、产气综合判断。若仅浑浊但不产气，或仅轻微变色，应结合 GB 标准规定的复检或后续确认步骤进行判断。

下列质控菌株接种待测试培养基后，于 35～37℃培养 24 h，观察生长、产酸和产气情况。

质控指标	质控菌株及编号	质控评定标准
生长率	大肠埃希氏菌 CMCC（B）44102	浑浊度 2，气体充满管内约 1/3，产酸、产气
阴性对照 / 非目标菌控制	金黄色葡萄球菌 CMCC（B）26003	浑浊度 0，培养液澄清，不产气

大肠埃希氏菌应表现为明显生长，并产生酸和气体，说明培养基的营养支持、乳糖发酵体系、pH 指示剂和倒置小导管判读功能正常。金黄色葡萄球菌在该质控条件下应不产气且无明显生长表现，可作为非目标菌控制参考。

若大肠埃希氏菌产气不足或培养基不变黄，应检查培养基称量、乳糖质量、指示剂状态、灭菌条件、pH、倒置小导管状态、菌株活性、接种量和培养温度。若阴性对照出现明显浑浊或产气，应排查污染、菌株误用、操作误差或培养条件异常。

乳糖发酵培养基为液体发酵鉴别培养基，不能直接观察单菌落，也不适合单独用于复杂样品中大肠菌群的选择性分离。检测时应按照 GB 标准流程，结合前期推定试验、确证试验和必要的后续鉴定步骤综合判断。

培养基分装时应配合倒置小导管使用，并确保灭菌后小导管内无预存气体。培养过程中应避免剧烈振摇，以免影响产气观察。结果判读时，应同时观察培养液浑浊度、颜色变化和气体生成情况，避免仅凭单一现象下结论。

干粉培养基使用后应立即密封，置于避光、干燥处保存，避免吸潮、结块或指示剂性能下降。配制后的培养基应按实验室验证条件保存，并在规定有效期内使用。若培养基出现污染、颜色异常、明显沉淀、pH 偏差较大或小导管异常，不宜用于正式检测。

总体而言，乳糖发酵培养基通过蛋白胨提供基础营养，以乳糖作为发酵底物，并利用溴甲酚紫显示产酸反应，配合倒置小导管观察产气，是大肠菌群乳糖发酵确证试验中常用的基础鉴别培养基。