金氏B（King’s B）培养基：用于铜绿假单胞菌产荧光素测定的确认培养基

产品信息与适用范围

项目	内容
产品名称	金氏B（King’s B）培养基
英文名称	King’s B Medium
产品货号	GF1055
产品规格	250 g/瓶
保质期	未开封条件下三年
用途	用于饮用天然矿泉水中铜绿假单胞菌的产荧光素测定试验
执行参考	GB 8538-2022《食品安全国家标准饮用天然矿泉水检验方法》

成分	用量	主要作用
蛋白胨	20.0 g/L	提供氮源、氨基酸和生长因子，支持铜绿假单胞菌及其他细菌生长
磷酸氢二钾	1.5 g/L	提供磷酸盐并参与缓冲体系，有利于荧光色素表达，同时可减少绿脓色素等非目标色素对观察的干扰
七水硫酸镁	1.5 g/L	提供镁离子，促进假单胞菌荧光色素产生
琼脂	15.0 g/L	凝固剂，用于制备斜面或固体培养基
甘油	10 mL/L，使用时另加	作为碳源，有利于铜绿假单胞菌生长及荧光色素形成
最终 pH	7.2±0.2	适合假单胞菌生长及产荧光反应观察

铜绿假单胞菌具有产生多种色素的能力，其中与 King’s B 培养基相关的主要观察指标是黄绿色水溶性荧光色素。该类荧光色素在紫外灯下更易观察，可作为铜绿假单胞菌确认试验中的重要辅助特征之一。

培养基中的蛋白胨为菌体生长提供基础营养，甘油作为碳源促进代谢活动；磷酸氢二钾提供磷酸盐并维持适宜 pH 条件，同时有助于荧光色素表现；硫酸镁提供镁离子，是促进荧光色素形成的重要无机盐。琼脂则用于形成稳定的固体培养基斜面，便于接种、培养和观察。

需要注意的是，King’s B 培养基的功能重点在于“促产荧光”而非强选择性抑菌。因此，在实际检测中通常应结合前期分离培养、形态观察、氧化酶试验及标准规定的其他确认项目综合判定，不能仅凭是否产荧光作出最终结论。

质控菌株接种后，于 30～35 ℃培养 24 h～5 d，观察生长情况及荧光反应。建议在暗室或弱光条件下，使用适宜波长紫外灯辅助观察荧光。

质控指标	质控菌株及编号	预期结果
生化特性	铜绿假单胞菌 ATCC 27853	生长良好，产荧光
生化特性	大肠埃希氏菌 ATCC 25922	生长良好，无荧光

从质控结果可以看出，该培养基并不以抑制大肠埃希氏菌为主要目的，大肠埃希氏菌可生长但不产生特征性荧光。因此，该培养基更适合作为产荧光特征观察培养基，而不是选择性分离培养基。

制备培养基时，应先将干粉充分分散于水中，再加入规定量甘油，并通过加热煮沸使其完全溶解。分装试管后按 121 ℃、15 min 条件灭菌，灭菌后趁热摆放成斜面，待凝固后备用。培养基表面应平整、无明显气泡、无污染，颜色和凝固状态应符合产品要求。

接种疑似菌株后，应按标准要求控制培养温度和观察时间。部分菌株产荧光强弱可能受菌龄、接种量、培养时间、培养基厚度及观察光源影响，因此应设置阳性和阴性质控菌株同步验证。若阳性质控不产荧光或阴性质控出现异常荧光，应排查培养基制备、灭菌条件、菌株状态和观察方式等因素。

干粉培养基应密封保存于阴凉、干燥、避光处，使用后应及时盖紧瓶盖，防止吸潮结块。称量时应避免粉尘吸入，建议佩戴口罩并在通风良好的环境中操作。开封后产品的实际可用期限受储存条件、取用频率和密封状态影响，应结合外观、流动性及质控结果综合判断。

本产品仅用于实验室微生物检验，不得用于临床诊断。检测结束后的带菌培养物、接种工具及污染耗材，应按实验室生物安全要求处理，通常可在 121 ℃高压灭菌 30 min 后再进行废弃物处置。

GB 8538-2022《食品安全国家标准饮用天然矿泉水检验方法》