亚硫酸盐-多粘菌素-磺胺嘧啶（SPS）琼脂基础：产气荚膜梭菌选择性计数培养基

产品信息与用途

配方组成及作用

使用时称取本品 42.0 g，加入蒸馏水或去离子水 1 L，加热煮沸至完全溶解后，于 121 ℃高压灭菌 15 min。冷却至约 50 ℃后，每 100 mL 基础培养基分别加入配套试剂 TJ028 与 TJ029 各 1 支，混匀后倒平板备用。最终 pH 为 7.0±0.2（25 ℃）。

检验原理

SPS琼脂基础的核心机制是“选择性抑制 + 硫化氢显色鉴别”。培养基中的胰酶消化酪蛋白胨与酵母浸粉提供丰富营养，满足产气荚膜梭菌在厌氧条件下的生长需求。

亚硫酸钠在梭菌代谢过程中作为硫源参与还原反应，产气荚膜梭菌能够还原亚硫酸盐并产生硫化氢（H₂S）。生成的硫化氢与柠檬酸铁铵反应形成黑色硫化铁沉淀，使菌落呈现典型黑色或中心黑化特征，这是该培养基的重要鉴别标志。

多粘菌素B和磺胺嘧啶钠共同构成选择性抑制体系，可有效抑制大多数革兰氏阴性菌及部分非目标细菌，从而提高产气荚膜梭菌的检出率与计数准确性。

需要注意的是，该培养基必须在严格厌氧条件下使用，否则产气荚膜梭菌生长受限或不形成典型黑色菌落，可能导致结果偏低。

质量控制

质控菌株接种后于 35～37 ℃厌氧条件下培养 24 h，观察菌落生长及显色情况。

其中 PR 表示生长恢复率，用于评价目标菌在培养基上的生长能力。理想情况下，产气荚膜梭菌应表现为良好生长并形成明显黑色菌落，而大肠埃希氏菌应被有效抑制，以保证培养基选择性符合标准要求。

操作要点与培养注意事项

SPS琼脂在使用过程中最关键的是厌氧环境控制与配套试剂添加。基础培养基灭菌后必须冷却至约 50 ℃再加入 TJ028 与 TJ029，以避免高温破坏选择性组分或影响显色体系稳定性。混匀后应尽快倾注平板，保证成分均匀分布。

培养时必须在严格厌氧条件下进行，可采用厌氧罐、厌氧袋或厌氧培养系统。若氧气暴露过高，产气荚膜梭菌可能不形成典型黑色菌落，甚至出现生长抑制。

观察结果时，应重点关注菌落颜色与形态。典型阳性菌落通常呈黑色或黑心状，这是硫化氢与铁盐反应形成沉淀的结果。非目标菌通常被抑制或形成无典型显色的菌落。

此外，不同菌株产H₂S能力存在差异，部分弱产硫菌可能显色不明显，因此应结合标准方法进行综合判定。

贮存与安全注意事项

本品应密封保存于阴凉、干燥、避光环境中，避免吸潮与氧化导致性能下降。开封后应尽快使用，并保持瓶口密封状态。

称量过程中应避免粉尘吸入，建议佩戴口罩并在通风环境中操作。本产品仅用于实验室微生物检验，不得用于临床用途。

实验结束后的培养物、平板及相关耗材应进行高压灭菌处理（121 ℃，30 min），确保生物安全后再进行废弃处置。

参考文献

GB/T 5750.12-2023《生活饮用水标准检验方法 第12部分：微生物指标》