双倍乳糖胆盐培养基（含中和剂）：化妆品粪大肠菌群测定用发酵培养基

产品信息与用途

配方组成及作用

培养基原理

双倍乳糖胆盐培养基的检验逻辑主要包括四个方面：营养支持、胆盐选择、中和保护和乳糖发酵判读。蛋白胨提供丰富的氮源和生长营养，使样品中可能存在的粪大肠菌群能够恢复和增殖。猪胆盐模拟肠道环境中的选择压力，可抑制多种革兰氏阳性菌，从而减少背景菌干扰。

乳糖是该培养基的关键鉴别底物。粪大肠菌群在适宜温度下发酵乳糖，可产生酸和气体。酸性代谢产物使溴甲酚紫由紫色转为黄色，气体则聚集在小倒管内。因此，典型阳性结果应表现为培养基浑浊、变黄，并伴随小倒管内产气。

卵磷脂和吐温-80用于改善化妆品样品检测的适用性。化妆品中常含防腐剂、乳化剂、表面活性剂或油脂成分，这些物质可能影响微生物恢复生长。卵磷脂可中和部分季铵盐类抑菌物质，吐温-80可中和部分酚类、防腐剂或表面活性抑菌成分，并有助于样品乳化分散，使微生物更充分接触培养基营养。

需要注意的是，产酸产气结果用于提示可能存在粪大肠菌群，但不能单独作为最终确证。实际检测应按照标准流程进行后续分离、复发酵、镜检或生化确认。

使用方法

称取本品76.0 g，加入蒸馏水或去离子水1 L，搅拌加热至完全溶解。分装于带有小倒管的试管中，每管10 mL，于115℃高压灭菌20 min，冷却后备用。

分装时应确保小倒管内充满培养基，避免残留气泡影响产气判读。灭菌后如小倒管中已有明显气泡，应排除后再使用，无法排除时应弃用该管。由于培养基含有胆盐、乳糖、卵磷脂和吐温-80，不宜长时间过度加热或反复灭菌，以免影响选择性、中和能力和指示剂颜色。

质量控制

按标签方法制备培养基后，接种质控菌株，于44±0.5℃培养48 h，观察生长、产酸和产气情况。

大肠埃希氏菌应表现为明显浑浊、培养基变黄并在小倒管中产气，用于验证培养基营养支持能力、乳糖发酵系统和产气观察系统是否正常。金黄色葡萄球菌应被抑制，用于评价胆盐选择性是否有效。若大肠埃希氏菌生长弱、不变黄或不产气，应重点检查培养温度、培养时间、乳糖含量、初始pH、小倒管状态和菌株活性。若金黄色葡萄球菌明显生长，则需关注胆盐浓度、灭菌条件、培养基保存状态或配制误差。

结果观察与判读要点

观察结果时应同时记录三项指标：肉汤是否浑浊、培养基是否变黄、小倒管是否产气。肉汤浑浊提示有微生物生长；培养基变黄提示乳糖发酵产酸；小倒管内气体提示乳糖发酵产气。典型粪大肠菌群阳性发酵管应同时出现浑浊、产酸和产气。

若培养基仅浑浊但不变黄、不产气，可能为非目标菌生长或乳糖不发酵菌；若变黄但无气体，应结合方法要求判断是否需要复试或进一步确认；若未接种对照管出现浑浊、变黄或气泡，则提示污染或配制异常，应停止使用。

操作与储存注意事项

本品不得用于临床检验。干粉培养基称量时应注意粉尘防护，建议佩戴口罩，避免吸入粉尘引起呼吸道不适。干粉培养基使用后应立即密封，置于避光、干燥处保存，防止吸潮结块。未开封产品在规定条件下保质期为三年；开封后受环境湿度、密封状态和取用频次影响，保质时间可能缩短，应根据实际保存状态评估。

由于本品含有卵磷脂和吐温-80，配制后可能略显乳浊或有轻微浑浊背景，判读时应以接种前对照管为基准。检测结束后的带菌试管、吸头、接种工具和其他污染物，应按实验室生物安全要求处理，建议经121℃高压灭菌30 min后再废弃。