酪蛋白琼脂：蜡样芽孢杆菌酪蛋白分解试验用培养基

产品信息与用途

配方组成及作用

培养基原理

酪蛋白是一类乳蛋白，在培养基中形成乳浊背景。某些细菌能够产生胞外蛋白酶或酪蛋白酶，将酪蛋白水解为可溶性小肽和氨基酸，使菌落周围原本不透明的区域变得澄清，形成可见透明圈。蜡样芽孢杆菌通常具有较强蛋白水解能力，因此在酪蛋白琼脂上常表现为透明圈阳性。

牛肉膏粉提供细菌生长所需的营养物质，氯化钠维持渗透压，磷酸氢二钠维持pH稳定，琼脂使培养基形成固体平板。溴麝香草酚蓝用于指示pH变化，在中性附近呈绿色，偏碱时逐渐变蓝，偏酸时可呈黄色。质控结果中，大肠埃希氏菌可使培养基由绿变蓝但无透明圈，说明颜色变化不能等同于酪蛋白分解阳性；判断酪蛋白分解能力时，应以菌落周围是否出现透明圈为核心依据。

使用方法

称取本品35.1 g，加入蒸馏水或去离子水1 L，搅拌加热煮沸至完全溶解，分装后于121℃高压灭菌15 min。灭菌后冷却至适宜温度，混匀后倾注无菌平板，凝固后备用。

配制时应充分加热，使琼脂完全溶解，并尽量保证酪蛋白分散均匀。由于酪蛋白本身可使培养基呈乳浊状态，灭菌后轻微不透明属于正常现象。若出现明显结块、异常沉淀、污染、凝固不良或pH明显偏离，应停止使用。

质量控制

按标签方法制备培养基后，接种质控菌株，于35～37℃培养24 h，观察菌落周围透明圈及培养基颜色变化。

蜡样芽孢杆菌应形成明显透明圈，说明培养基中的酪蛋白底物和酶反应系统正常。大肠埃希氏菌作为阴性对照，虽可引起培养基颜色变化，但不应形成透明圈，用于区分pH变化与真正的酪蛋白水解反应。

若蜡样芽孢杆菌不形成透明圈，应重点检查菌株活性、培养时间、培养温度、酪蛋白分散状态、培养基pH及灭菌条件。若大肠埃希氏菌出现类似透明圈，应注意是否为接种过重、培养过久、培养基分散不均、污染或判读误差造成。

结果观察与判读要点

酪蛋白分解阳性通常表现为菌落周围出现清晰透明圈，透明圈与乳浊背景之间界限较明显。阴性则菌落周围无透明区域，培养基背景基本保持一致。观察时应在良好光线下进行，可将平板置于深色背景上辅助判断。

判读时要避免将颜色变蓝误判为酪蛋白分解阳性。溴麝香草酚蓝反映的是pH变化，而透明圈反映的是酪蛋白被水解。对于蜡样芽孢杆菌鉴定，透明圈阳性仅是一个支持性生化特征，还应结合其他鉴定结果综合判断。

操作与储存注意事项

本品不得用于临床检验。干粉培养基称量时应注意粉尘防护，建议佩戴口罩，避免吸入粉尘引起呼吸道不适。干粉使用后应立即密封，置于避光、干燥处保存，防止吸潮结块。未开封产品在规定条件下保质期为三年；开封后受环境湿度、密封状态和取用频次影响，保质时间可能缩短，应根据实际保存状态评估。

制备后的平板应避免长时间暴露，防止干裂、污染或水分蒸发影响透明圈观察。检测结束后的带菌平板、接种工具和其他污染物，应按实验室生物安全要求处理，建议经121℃高压灭菌30 min后再废弃。