EC-MUG培养基:生活饮用水中大肠埃希氏菌多管发酵法检测培养基

2026-06-22 18:12:12
逗点生物
简介

EC-MUG培养基:生活饮用水中大肠埃希氏菌多管发酵法检测培养基

产品信息与用途

项目 内容
产品名称 EC-MUG培养基
英文名称 EC-MUG Medium
货号 GF1116
产品规格 100 g/瓶
保质期 未开封三年
储存条件 2~8℃避光、干燥处保存
产品用途 用于多管发酵法测定生活饮用水及水源水中的大肠埃希氏菌
参考标准 GB/T 5750.12-2023《生活饮用水标准检验方法 第12部分:微生物指标》
培养条件 44.5±0.5℃培养24 h,具体按检测方法执行
典型阳性结果 肉汤浑浊,并在366 nm紫外灯下产生蓝白色荧光

配方组成及作用

成分 用量 主要作用 用途说明
胰蛋白胨 20.0 g/L 提供氮源、氨基酸和多肽 支持大肠埃希氏菌及耐热大肠菌群恢复和生长
3号胆盐 1.5 g/L 选择性抑菌剂 抑制部分革兰氏阳性菌和非肠道菌,增强培养基选择性
乳糖 5.0 g/L 可发酵糖类 支持大肠菌群发酵代谢;若方法要求,可配合小倒管观察产气
磷酸氢二钾 4.0 g/L 缓冲剂 与磷酸二氢钾组成缓冲体系,维持pH稳定
磷酸二氢钾 1.5 g/L 缓冲剂 减少代谢产物引起的pH大幅波动
氯化钠 5.0 g/L 维持渗透压平衡 保持细胞正常生理环境
MUG 0.05 g/L 荧光底物 被大肠埃希氏菌β-葡萄糖醛酸苷酶分解后,在366 nm紫外灯下产生蓝白色荧光
最终pH 6.9±0.2,25℃ 维持适宜近中性环境 保证目标菌生长、胆盐选择性和荧光反应稳定
干粉称量 37.1 g/L 商品化配制量 按标签称取本品37.1 g配制1 L培养基

培养基原理

EC-MUG培养基的检验原理可以概括为“选择性培养+荧光鉴别”。胰蛋白胨为细菌提供生长所需的氮源和多肽,乳糖为可发酵糖类,磷酸盐缓冲体系维持培养过程中的pH稳定,氯化钠维持渗透压。3号胆盐能够抑制部分革兰氏阳性菌和非目标菌,配合44.5±0.5℃培养条件,可提高对耐热肠道菌群和大肠埃希氏菌的筛选能力。

MUG是该培养基中最关键的鉴别成分。大多数大肠埃希氏菌可产生β-葡萄糖醛酸苷酶,将MUG水解,释放出具有荧光特性的产物。培养后在366 nm紫外灯下观察,若出现蓝白色荧光,提示可能存在大肠埃希氏菌。鼠伤寒沙门氏菌等非目标菌即使能够在一定条件下生长,通常不产生该荧光反应;粪肠球菌则应受到选择性抑制,培养液保持澄清且无荧光。

需要注意的是,EC-MUG培养基主要用于检测大肠埃希氏菌的指示性反应,不能脱离标准流程单独判定样品是否合格。少数大肠埃希氏菌菌株可能MUG反应弱或阴性,个别非目标菌也可能出现干扰,因此应结合阳性对照、阴性对照、空白对照及标准规定的确认步骤进行判断。

使用方法

称取本品37.1 g,加入蒸馏水或去离子水1 L,搅拌加热煮沸至完全溶解,分装后于115℃高压灭菌20 min,冷却后备用。

若检测方法要求观察产气,可按标准规定分装至带小倒管试管中;若仅按产品标签进行荧光确认,应以培养液浑浊和366 nm紫外荧光为主要观察指标。配制时应避免长时间强光照射,因为MUG及其荧光反应对光照和储存条件较敏感。灭菌后如出现明显沉淀、颜色异常、污染、pH明显偏离或荧光背景异常,应停止使用。

质量控制

按标签方法制备培养基后,接种质控菌株,于44.5±0.5℃培养24 h,观察生长情况及366 nm紫外灯下的荧光反应。

质控指标 质控菌株及编号 质控评定标准
生长率 大肠埃希氏菌 CMCC(B) 44102 浑浊度2,在366 nm紫外灯下产生蓝白色荧光
特异性 鼠伤寒沙门氏菌 ATCC 14028 366 nm紫外灯下不产生蓝白色荧光
选择性 粪肠球菌 ATCC 29212 培养液澄清,无荧光

大肠埃希氏菌质控株应生长良好并产生蓝白色荧光,用于验证培养基营养支持能力、MUG底物反应和荧光观察系统是否正常。鼠伤寒沙门氏菌不应产生荧光,用于评价MUG反应特异性。粪肠球菌应被抑制,用于评价胆盐和高温条件下的选择性。

若大肠埃希氏菌不发荧光,应检查MUG有效性、培养温度、培养时间、紫外灯波长、观察环境和菌株活性。若鼠伤寒沙门氏菌出现荧光,应排查污染、菌株混杂、紫外观察误判或培养基背景荧光。若粪肠球菌明显生长,应关注胆盐选择性、培养温度是否偏低、灭菌条件和培养基保存状态。

结果观察与判读要点

观察结果时,应先比较接种管与空白对照管的浑浊度,再在暗处使用366 nm紫外灯观察荧光。典型大肠埃希氏菌阳性管表现为培养液浑浊,并出现清晰蓝白色荧光。无荧光或仅有弱背景光时,应与阳性质控和未接种空白管对比,避免将玻璃反光、培养基本底荧光或外部光源干扰误判为阳性。

若培养液浑浊但无荧光,说明可能存在非目标菌生长,或待检菌不具备MUG阳性反应,应按标准方法进一步处理。若培养液不浑浊但有轻微荧光,应优先考虑背景干扰、污染或观察误差,并结合对照复核。多管发酵法结果还应按标准要求结合管数、稀释度和MPN表进行统计或报告。

操作与储存注意事项

本品需于2~8℃避光、干燥处保存,用后立即旋紧瓶盖。干粉培养基容易吸潮,开封后应减少暴露时间,避免反复取用造成水分进入。未开封产品在规定条件下保质期为三年;开封后保质时间受储存湿度、取用频次和密封状态影响,应根据实际情况评估。

本品不得用于临床检验。称量时应注意粉尘防护,建议佩戴口罩,避免吸入粉尘引起呼吸道不适。使用紫外灯观察荧光时,应避免紫外线直射眼睛和皮肤,必要时佩戴防护眼镜或使用带观察窗的紫外检测箱。检测结束后的带菌培养液、试管、吸头和其他污染物,应按实验室生物安全要求处理,建议经121℃高压灭菌30 min后再废弃。