空肠弯曲菌的鉴定：从可疑菌落到生化确认

空肠弯曲菌（Campylobacter jejuni）是重要的食源性致病菌，常与禽肉、生乳、动物源性食品及交叉污染有关。它对氧气敏感，适宜在微需氧条件下生长，菌体形态细小弯曲，常呈逗点状、S形、螺旋状或“海鸥展翅状”。在食品微生物检验中，空肠弯曲菌的鉴定不能只依靠选择性平板上的菌落外观，而应结合纯培养、形态观察、动力观察、氧化酶试验、生长条件试验以及关键生化反应进行综合判断。

GB 4789.9-2014中，空肠弯曲菌鉴定分为两个层次：第一步是判断可疑菌落是否属于弯曲菌属；第二步是通过过氧化氢酶、马尿酸盐水解和吲哚乙酸酯水解等试验，进一步区分空肠弯曲菌与结肠弯曲菌、海鸥弯曲菌、乌普萨拉弯曲菌等近缘菌。需要注意的是，GB 4789.9-2025已将结肠弯曲菌纳入标准检测范围，实际检验应按现行标准执行。

一、可疑菌落为什么要先转种纯化？

从选择性分离平板上挑取可疑菌落后，应接种至哥伦比亚血琼脂平板，在微需氧条件下培养，获得较纯的菌落用于后续鉴定。通常挑取5个可疑菌落；若可疑菌落少于5个，则全部挑取。这样做的目的，是避免因单个菌落异常、混杂菌污染或菌落形态不典型而造成漏检或误判。

弯曲菌在选择性培养基上的菌落可能受样品背景菌、培养时间、培养气氛、平板含水量和抗生素选择压力影响，表现出一定差异。因此，后续鉴定应建立在新鲜、纯化、状态良好的菌落基础上。

二、弯曲菌属的初步鉴定项目

弯曲菌属的鉴定主要看五个方面：菌体形态、运动方式、氧化酶反应、低温微需氧生长情况和高温有氧生长情况。符合这些特征的可疑菌落，可初步判定为弯曲菌属。

这些项目不是孤立判断，而是组合判断。例如，氧化酶阳性并不能单独说明是弯曲菌，因为许多非弯曲菌也可氧化酶阳性；菌体弯曲也可能受培养状态影响。因此，只有形态、动力、氧化酶和生长条件共同符合，才更有鉴定意义。

三、形态观察：为什么常见“海鸥展翅状”？

弯曲菌为革兰氏阴性细菌，菌体细长、弯曲，镜检时常见小逗点状、S形、螺旋状，两个菌体末端相接时可呈“海鸥展翅状”。这一形态是弯曲菌鉴定中的重要线索。

但形态观察也有局限。培养时间过长、氧暴露过多、菌体受损或环境条件不适宜时，弯曲菌可能变为球形或短杆状，导致形态不典型。因此，形态观察最好使用新鲜培养物，并结合其他鉴定项目综合判断。

四、动力观察：螺旋状运动是重要特征

弯曲菌具有极生鞭毛，典型运动方式为快速、螺旋状或穿梭样运动。检测时，可将可疑菌落悬浮于布氏肉汤等适宜液体中，用相差显微镜观察运动状态。

若菌株活性良好，常可见快速而有方向性的运动。若培养物过老、菌体受氧损伤、悬液浓度过高或观察条件不适，运动可能不明显。因此，运动阴性不能单独排除弯曲菌，应结合菌体形态和后续生化结果判断。

五、氧化酶试验：快速但要注意时限

弯曲菌通常氧化酶阳性。操作时，可用铂/铱接种环或玻璃棒挑取可疑菌落，涂于氧化酶试剂润湿的滤纸上。若在规定时间内出现紫红色、紫罗兰色或深蓝色，判为阳性。

氧化酶试验应注意两个问题：一是不要使用可能带来假阳性的金属接种环；二是结果应在短时间内判读，放置过久可能因试剂自氧化而出现假阳性。氧化酶阳性只是弯曲菌属鉴定的一部分，不能替代生长条件和生化鉴定。

六、生长条件试验：微需氧是关键

弯曲菌对氧气敏感，典型食品检测目标菌需要在微需氧环境中培养。GB 4789.9-2014中的弯曲菌属鉴定要求观察其在25℃微需氧条件下和42℃有氧条件下的生长情况。符合弯曲菌属特征的可疑菌落，在25℃微需氧条件下不生长，在42℃有氧条件下也不生长。

这里容易产生误解：空肠弯曲菌常可在42℃微需氧条件下生长，但这并不等于它能在42℃有氧条件下生长。弯曲菌属鉴定中设置42℃有氧生长试验，正是为了验证其对普通有氧环境的不适应性。

七、空肠弯曲菌的进一步鉴定

完成弯曲菌属初步鉴定后，还需要通过生化试验进一步确认是否为空肠弯曲菌。2014版标准中常用的关键试验包括过氧化氢酶试验、马尿酸钠水解试验和吲哚乙酸酯水解试验。

其中，马尿酸钠水解阳性是鉴别空肠弯曲菌的重要依据。结肠弯曲菌、海鸥弯曲菌和乌普萨拉弯曲菌通常为马尿酸盐水解阴性，因此该试验在区分空肠弯曲菌和结肠弯曲菌时尤其关键。

八、马尿酸钠水解试验为什么重要？

空肠弯曲菌通常具有马尿酸酶活性，可水解马尿酸钠，产生可与茚三酮反应的产物，最终出现深紫色。若结果为深紫色，可判为阳性；若仅为淡紫色或无明显颜色变化，应判为阴性。

该试验的关键在于菌量、反应时间、温度和判读颜色。菌量不足可能导致弱阳性或假阴性；茚三酮加入后振荡过度或判读时间不当，也可能影响结果。对于颜色介于阳性和阴性之间的可疑结果，应结合重复试验或其他确认方法判断。

九、吲哚乙酸酯水解试验的判读

吲哚乙酸酯水解试验用于观察菌株是否能水解吲哚乙酸酯。若发生水解，通常在规定时间内出现深蓝色；若无颜色变化，则判为阴性。原文中的“吲哚乙酸脂”应修正为“吲哚乙酸酯”。

该试验可辅助区分不同弯曲菌。空肠弯曲菌和结肠弯曲菌通常为阳性，海鸥弯曲菌通常为阴性，乌普萨拉弯曲菌通常为阳性。因此，它不能单独区分空肠弯曲菌和结肠弯曲菌，必须与马尿酸盐水解试验联合使用。

十、常见弯曲菌的鉴定特征对比

从表中可以看出，空肠弯曲菌的典型组合为：过氧化氢酶阳性、马尿酸盐水解阳性、吲哚乙酸酯水解阳性。结肠弯曲菌与空肠弯曲菌最容易混淆，因为两者均可表现为过氧化氢酶阳性和吲哚乙酸酯阳性，主要区别在于结肠弯曲菌马尿酸盐水解阴性。

十一、鉴定过程中的注意事项

弯曲菌对氧气、干燥和温度变化较敏感，鉴定时应尽量使用新鲜培养物，减少空气中暴露时间。哥伦比亚血琼脂平板应质量稳定，血液成分、平板含水量和微需氧环境都会影响菌体生长状态。若培养气氛不合格，可能出现生长弱、菌落少或生化反应不典型。

氧化酶试验、过氧化氢酶试验和吲哚乙酸酯水解试验都属于快速反应项目，应按规定时间判读。过早判读可能漏检弱阳性，过晚判读可能出现非特异性颜色变化。马尿酸盐水解试验对菌量和温育条件较敏感，应避免挑取过少菌体或使用老化菌落。

对于食品样品中背景菌较多的情况，建议对多个可疑菌落分别鉴定。若结果不一致，应结合菌落来源、纯度、形态、生长特征和必要的补充确认方法综合判断。

十二、小结

空肠弯曲菌鉴定的基本思路，是先从可疑菌落中确认弯曲菌属，再通过关键生化反应确认空肠弯曲菌。弯曲菌属鉴定重点包括革兰氏阴性弯曲菌体、螺旋状运动、氧化酶阳性、25℃微需氧不生长和42℃有氧不生长。空肠弯曲菌进一步表现为过氧化氢酶阳性、马尿酸盐水解阳性和吲哚乙酸酯水解阳性。

实际检测中，鉴定结果应结合培养条件、菌株状态、平板质量和对照结果综合判断。由于GB 4789.9-2025已将结肠弯曲菌纳入检测范围，实验室在开展食品中弯曲菌检测时，应按照现行标准更新培养基、试剂、检验流程和结果报告要求。