改良CCDA基础：用于弯曲菌选择性分离培养的血液替代型培养基
- 2026-06-23 14:53:02
- 逗点生物
改良CCDA基础：用于弯曲菌选择性分离培养的血液替代型培养基
一、产品用途与基本信息
| 项目 | 内容 |
|---|---|
| 产品名称 | 改良CCDA基础（CCDA Base, Modified） |
| 产品货号 | GF1119 |
| 产品规格 | 250 g/瓶 |
| 主要用途 | 弯曲菌选择性分离培养（食品样品） |
| 使用方式 | 灭菌后加入选择性添加剂使用 |
| 推荐培养条件 | 42±1 ℃，微需氧培养24～48 h |
| 最终pH | 7.4±0.2（25 ℃） |
二、配方组成、用量及作用
| 成分 | 用量（g/L） | 主要作用 | 用途说明 |
|---|---|---|---|
| 蛋白胨 | 10.0 | 提供氮源、碳源、氨基酸和短肽 | 支持弯曲菌复苏、生长和菌落形成 |
| 牛肉浸出粉 | 10.0 | 提供氨基酸、核苷酸、矿物质和生长因子 | 增强培养基营养水平，改善目标菌生长 |
| 氯化钠 | 5.0 | 维持渗透压稳定 | 保持细胞正常生理状态 |
| 酸水解酪蛋白 | 3.0 | 提供小分子肽和氨基酸 | 为营养要求较高的弯曲菌提供易利用氮源 |
| 活性炭 | 4.0 | 吸附有毒代谢物和抑制性物质，改善氧化应激环境 | 代替血液部分保护作用，有利于弯曲菌生长 |
| 去氧胆酸钠 | 1.0 | 选择性抑菌剂 | 抑制部分革兰氏阳性菌及胆盐敏感菌群，提高选择性 |
| 丙酮酸钠 | 0.25 | 清除过氧化物，减轻氧化损伤 | 有助于受损弯曲菌复苏和生长 |
| 硫酸亚铁 | 0.25 | 与丙酮酸钠、活性炭共同构成保护体系 | 改善目标菌对氧化压力的耐受性 |
| 琼脂 | 12.0 | 凝固剂 | 形成稳定平板，便于菌落分离和观察 |
| 最终pH | 7.4±0.2 | 维持适宜酸碱环境 | 保证弯曲菌生长和选择性表现稳定 |
三、配套选择性添加剂及作用
改良CCDA基础本身提供营养、凝固和部分选择性作用，但实际用于弯曲菌分离时，还需要加入配套选择性试剂。按产品说明，每100 mL基础培养基加入1支配套试剂TJ025，混匀后倒平板。配套试剂中的抗菌成分用于进一步抑制食品样品中的伴随菌，减少杂菌覆盖，提高弯曲菌分离效率。
| 添加成分 | 常见作用对象 | 主要作用 | 注意事项 |
|---|---|---|---|
| 头孢哌酮 | 部分革兰氏阴性肠道伴随菌 | 抑制普通肠道菌及部分竞争性杂菌 | 原资料中的“先锋哌酮”建议规范为“头孢哌酮” |
| 两性霉素B | 酵母和霉菌 | 抑制真菌污染 | 对提高复杂样品平板洁净度有帮助 |
| 利福平 | 部分非目标细菌 | 抑制部分非弯曲菌杂菌 | 需按配套试剂说明加入，避免过量影响目标菌 |
| 去氧胆酸钠 | 部分胆盐敏感菌 | 与抗菌添加剂共同提高选择性 | 已包含于基础培养基中 |
四、检验原理
改良CCDA的核心是“营养支持 + 氧化保护 + 选择性抑菌”。蛋白胨、牛肉浸出粉和酸水解酪蛋白为弯曲菌提供生长所需的氨基酸、肽类和营养因子，使目标菌能够在微需氧条件下形成可观察菌落。弯曲菌对氧较敏感，培养过程中容易受到过氧化物等氧化性物质影响，因此培养基中加入活性炭、丙酮酸钠和硫酸亚铁，用于吸附或中和部分抑制性物质，改善目标菌复苏环境。
选择性方面，去氧胆酸钠可抑制部分非目标菌，配套试剂中的头孢哌酮、两性霉素B和利福平进一步限制肠道杂菌、真菌及其他竞争性微生物的生长。需要注意的是，改良CCDA不是确认培养基，平板上出现疑似弯曲菌典型菌落后，还需结合显微镜形态、氧需求特征、生化反应、质谱或分子方法等进行确认。
五、使用方法
称取本品45.5 g，加入蒸馏水或去离子水1 L，搅拌加热至完全溶解后分装三角瓶，121 ℃高压灭菌15 min。灭菌结束后冷却至约50 ℃，每100 mL基础培养基加入1支配套试剂TJ025，充分摇匀后倾注无菌平板，凝固后备用。
配制时应注意，选择性添加剂不宜与基础培养基一同高压灭菌，以免抗菌活性下降。由于培养基含有活性炭，外观呈深色或黑色属于正常现象，倒平板前应充分混匀，避免活性炭沉降造成平板成分分布不均。平板制备后应避免过度干燥，也不宜有明显冷凝水，以免影响菌落扩散特征和分离效果。
六、质量控制
| 质控指标 | 质控菌株及编号 | 培养条件 | 质控评定标准 | 结果说明 |
|---|---|---|---|---|
| 生长率 | 空肠弯曲杆菌 CMCC(B)22073 或 ATCC 33291 | 42±1 ℃，微需氧培养24～48 h | PR≥0.5，菌落有光泽、潮湿、扁平，呈扩散生长倾向 | 说明培养基对目标菌具有良好支持能力 |
| 选择性 | 大肠埃希氏菌 CMCC(B)43201 或 ATCC 25922 | 42±1 ℃，微需氧培养24～48 h | G≤1 | 评价对部分革兰氏阴性伴随菌的抑制能力 |
| 选择性 | 金黄色葡萄球菌 CMCC(B)26305 或 ATCC 6538 | 42±1 ℃，微需氧培养24～48 h | G≤1 | 评价对革兰氏阳性伴随菌的抑制能力 |
七、结果观察与常见问题
空肠弯曲菌在改良CCDA平板上通常形成灰白色至灰色、湿润、有光泽、较扁平的菌落，部分菌落可呈轻度扩散生长趋势。由于培养基含活性炭，平板背景较深，观察时应注意光线角度和菌落边缘形态。若平板杂菌较多，应检查样品前处理、增菌条件、选择性添加剂是否正确加入，以及平板是否放置过久导致选择性下降。若目标菌生长弱或不生长，应重点排查微需氧环境、培养温度、添加剂浓度、培养基pH和菌株活性。
改良CCDA用于分离而非最终确认。食品样品中可能存在少量形态相似或耐受选择剂的非目标菌，因此疑似菌落应继续进行确认试验。实际检测时还应结合增菌培养基、选择性平板、培养气氛和后续鉴定方法综合判断。
八、贮存与注意事项
本品不得用于临床检验。干粉培养基使用后应立即密封，置于避光、干燥处保存，避免吸潮、结块和性能下降。称量时应注意粉尘防护，建议佩戴口罩并在通风良好的环境中操作。未开封产品在规定条件下保质期为三年；开封后受储存湿度、温度和使用频次影响，保质时间可能缩短。配制后的含选择性添加剂平板应按实验室验证条件保存，并尽量在规定期限内使用。
参考标准与资料
GB 4789.9《食品安全国家标准 食品微生物学检验 空肠弯曲菌和结肠弯曲菌检验》。
FDA Bacteriological Analytical Manual（BAM）：Campylobacter 相关培养基资料。
