空肠弯曲菌检验的设备材料及试剂：GB 4789.9-2014流程解读与现行标准提示

空肠弯曲菌（Campylobacter jejuni）是重要的食源性致病菌，常见于禽肉、生乳、水产品及受污染的食品加工环境中。与常规需氧或兼性厌氧菌不同，空肠弯曲菌对氧气较敏感，通常需要在微需氧条件下培养，并且对温度、培养基选择性和样品处理方式要求较高。因此，开展空肠弯曲菌检验时，设备、培养基和试剂的配置是否规范，会直接影响目标菌的恢复、增菌、分离和鉴定结果。

GB 4789.9-2014《食品安全国家标准 食品微生物学检验 空肠弯曲菌检验》规定了食品中空肠弯曲菌的检验方法，代替GB/T 4789.9-2008。与2008版相比，2014版修改了标准名称、适用范围、设备材料、培养基和试剂、样品处理方法，并删除了药物敏感性试验和全自动酶联荧光免疫分析仪筛选法。需要注意的是，GB 4789.9已发布2025版，现行标准名称已调整为“空肠弯曲菌和结肠弯曲菌检验”，实际检测应以现行有效标准为准。

一、为什么空肠弯曲菌检验对设备要求更高？

空肠弯曲菌属于微需氧菌，不能像大肠菌群、沙门氏菌等常规食品微生物那样直接在普通有氧条件下培养。其典型培养气氛为低氧、高二氧化碳环境，2014版标准中微需氧条件为5%氧气、10%二氧化碳和85%氮气。因此，微需氧培养装置是空肠弯曲菌检验的核心设备之一。

此外，空肠弯曲菌检验涉及样品均质、离心浓缩、滤膜过滤、不同温度培养、pH调节、菌体形态观察和生化鉴定等步骤，所以设备配置不仅要满足常规微生物实验室要求，还要能适应不同食品基质的处理需要。

二、主要设备和材料及作用

其中，微需氧培养装置、恒温培养设备、离心机和显微镜对检验结果影响较大。若微需氧气氛不稳定，目标菌可能生长弱或不生长；若培养温度偏离要求，可能影响弯曲菌的选择性增殖；若显微镜观察条件不佳，可能漏判其典型弯曲形态和螺旋状运动。

三、培养基和试剂的总体作用

空肠弯曲菌检验中的培养基和试剂可大致分为四类：增菌培养基、选择性分离培养基、纯培养及悬浮培养基、鉴定试剂。不同培养基和试剂对应不同步骤，不能相互替代。

这些培养基和试剂构成了从“样品中恢复目标菌”到“分离可疑菌落”再到“生化确认”的完整体系。

四、Bolton肉汤：增菌阶段的核心培养基

Bolton肉汤是空肠弯曲菌检验中最重要的增菌培养基之一。它的作用是让样品中数量较低或受到冷藏、冷冻、氧暴露等损伤的目标菌恢复活性，并在微需氧条件下增殖。食品样品背景菌复杂，Bolton肉汤中的选择性成分可抑制部分杂菌，从而提高后续分离平板上目标菌的检出机会。

Bolton肉汤的质量控制重点包括pH、无菌性、促生长能力和选择性。若选择性过强，可能抑制受损空肠弯曲菌恢复；若选择性不足，背景菌可能大量生长，影响后续分离。实际使用时还应注意添加剂加入温度和保存条件，避免抗生素类成分失活。

五、mCCDA和Skirrow血琼脂：分离培养的关键平板

mCCDA琼脂即改良木炭头孢哌酮脱氧胆酸盐琼脂，是弯曲菌常用选择性分离培养基。其典型可疑菌落通常为淡灰色、有金属光泽、潮湿、扁平，并有扩散生长倾向。mCCDA中的木炭可吸附有害代谢产物，选择性成分则抑制背景菌。

Skirrow血琼脂也是弯曲菌选择性分离常用培养基。可疑菌落可表现为灰色、扁平、湿润、有光泽，并沿接种线扩散；也可能形成分散、凸起、边缘整齐、发亮的单个菌落。两类培养基联合使用，有助于提高疑似菌落的发现率。

对于培养基生产和使用实验室，应重点控制平板含水量、血液或添加剂质量、选择性抗生素活性、pH、无菌性和批间一致性。平板过湿可能导致菌落过度扩散，过干则可能影响弯曲菌生长。

六、哥伦比亚血琼脂和布氏肉汤：用于纯培养与鉴定

选择性平板上挑取的可疑菌落，通常需要转种至哥伦比亚血琼脂平板，在微需氧条件下培养，以获得较纯的菌落用于后续鉴定。哥伦比亚血琼脂营养丰富，有利于弯曲菌恢复和形成较稳定的菌落状态。

布氏肉汤常用于制备菌悬液，便于显微镜下观察弯曲菌的运动性。弯曲菌典型运动呈螺旋状或快速穿梭样，但若菌株老化、受氧损伤或菌液制备不当，运动可能不明显。因此，动力观察宜使用新鲜培养物。

七、氧化酶、马尿酸盐和吲哚乙酸酯试剂的鉴定意义

空肠弯曲菌的确认不能只依靠菌落外观。氧化酶试验、过氧化氢酶试验、马尿酸钠水解试验和吲哚乙酸酯水解试验，是2014版标准中常用的鉴定项目。

马尿酸钠水解阳性是空肠弯曲菌鉴定中的重要特征。结肠弯曲菌通常为马尿酸盐水解阴性，因此该试验在区分二者时具有较高价值。吲哚乙酸酯纸片试验可作为辅助项目，但不能单独作为最终确认依据。

八、0.1%蛋白胨水与硫代硫酸钠的作用

0.1%蛋白胨水常用于样品冲洗、悬浮和稀释。它的营养水平较低，主要作用是维持细菌在处理过程中的基本稳定性，而不是促进大量增殖。整禽冲洗、乳制品沉淀重悬、样品稀释等步骤中都可能用到0.1%蛋白胨水。

1 mol/L硫代硫酸钠溶液主要用于含氯水样检测。若水样经过氯处理，余氯会继续杀灭或损伤目标菌，导致假阴性风险。因此，过滤前需用硫代硫酸钠中和余氯，以保护样品中可能存在的弯曲菌。

九、显色培养基和生化鉴定系统的定位

空肠弯曲菌显色培养基可作为补充筛选工具，有助于从复杂背景菌中快速识别疑似菌落。但不同厂家显色原理和菌落颜色判读规则可能不同，使用时应严格按产品说明书执行，并配套阳性和阴性质控菌株验证。

生化鉴定试剂盒或生化鉴定卡可用于疑似菌株进一步确认。需要注意的是，生化鉴定结果应结合形态观察、氧化酶反应、微需氧生长特性和选择性平板表现综合判断。对于不典型菌株或结果矛盾的情况，应采用现行标准允许的进一步确认方法。

十、设备和试剂质量控制要点

空肠弯曲菌对环境条件较敏感，设备和试剂质控应贯穿整个检验流程。培养箱应定期校准，确保25 ℃、36 ℃和42 ℃条件准确；微需氧装置应验证气体环境是否稳定；离心机应确认实际离心力；pH计应定期校准；滤膜和无菌耗材应确认无菌、无抑菌残留。

培养基和试剂方面，应重点关注以下内容：Bolton肉汤是否支持目标菌恢复，mCCDA和Skirrow血琼脂是否兼具促生长和选择性，哥伦比亚血琼脂是否支持纯培养，氧化酶试剂和过氧化氢溶液是否在有效期内，马尿酸盐水解试剂和吲哚乙酸酯纸片是否能产生稳定阳性反应。

十一、现行标准变化提示

GB 4789.9-2014仅规定食品中空肠弯曲菌的检验方法。GB 4789.9-2025已将标准名称调整为《食品安全国家标准 食品微生物学检验 空肠弯曲菌和结肠弯曲菌检验》，适用范围扩展为空肠弯曲菌和结肠弯曲菌。新版还对设备材料、培养基和试剂、检验程序、操作步骤等内容进行了修改，并增加了实时荧光PCR鉴定方法和MALDI-TOF MS鉴定方法。

因此，本文适合作为GB 4789.9-2014设备材料和试剂体系的历史解读。实验室开展实际检验时，应及时更新标准文本、培养基清单、鉴定流程和结果报告模板，避免继续按废止版本出具检测结论。

小结

空肠弯曲菌检验的设备和试剂配置，核心围绕微需氧培养、选择性增菌、选择性分离和生化鉴定展开。Bolton肉汤用于增菌恢复，mCCDA和Skirrow血琼脂用于选择性分离，哥伦比亚血琼脂用于纯培养，氧化酶、马尿酸钠、吲哚乙酸酯和过氧化氢试剂用于鉴定确认。微需氧培养装置、恒温培养设备、离心机、显微镜和pH检测设备则共同保障流程稳定运行。

对于培养基生产企业和检测实验室而言，空肠弯曲菌检验的关键不是单一培养基或单一试剂，而是整套体系的匹配性和稳定性。只有设备校准合格、微需氧条件可靠、培养基促生长和选择性平衡、鉴定试剂反应稳定，才能提高食品中空肠弯曲菌检验结果的准确性和可追溯性。