改良克氏双糖铁琼脂：用于小肠结肠炎耶尔森氏菌生化鉴定的斜面培养基

一、产品用途与基本信息

二、配方组成、用量及作用

三、检验原理

改良克氏双糖铁琼脂的核心是通过高层斜面结构，同时观察斜面和底层的糖代谢差异。培养基中含有较高浓度的山梨醇和较低浓度的葡萄糖。测试菌若能发酵相应糖类，会产生酸性代谢产物，使酚红指示剂变黄；若不能利用糖或糖耗尽后分解蛋白胨产碱，则培养基可呈红色或维持偏碱反应。

斜面部分与氧接触较多，底层部分相对缺氧，因此两者可反映不同代谢条件下的酸碱变化。结果通常用A和K表示：A代表酸性反应，培养基变黄；K代表碱性反应，培养基变红。A/A表示斜面和底层均为酸性，K/A表示斜面碱性、底层酸性，K/K表示斜面和底层均为碱性或无糖发酵酸化表现。

培养基中的硫代硫酸钠可作为硫源，部分细菌能将其还原生成硫化氢；硫化氢与柠檬酸铁铵提供的铁离子结合，生成黑色硫化铁沉淀，因此出现黑色沉淀可判定为H₂S阳性。若培养基出现裂隙、气泡、底层上冲或琼脂断裂，则提示产气阳性。

四、使用方法

称取本品65.0 g，加入蒸馏水或去离子水1 L，搅拌加热煮沸至完全溶解，分装试管后，于121 ℃高压灭菌15 min。灭菌后趁热摆放成高层斜面，使其同时具有斜面和较深底层，冷却凝固后备用。

接种时通常挑取已纯化的疑似菌落，用接种针先穿刺底层，再划线接种斜面。培养时置26±1 ℃需氧培养24 h。观察时应分别记录斜面颜色、底层颜色、是否产气、是否有黑色沉淀，以及菌体生长情况。结果判断应在规定时间内进行，培养过久可能因蛋白胨分解产碱导致斜面返红，影响判读。

五、生化反应判读

六、质量控制

注：原资料中“支气管炎鲍特氏菌 CMCC(B)40001”与对比实验中的“粪产碱杆菌 CMCC(B)40001”不一致。根据常用质控菌株编号对应关系，CMCC(B)40001更常对应粪产碱杆菌，建议在产品资料中统一修正为“粪产碱杆菌 CMCC(B)40001”。

七、典型反应与对比结果整理

注：原表中“空气阴性”应为“产气阴性”；部分“其它特征”栏信息不完整，整理时不再保留无明确意义的内容。

八、结果观察与应用提示

小肠结肠炎耶尔森氏菌在改良克氏双糖铁琼脂上通常表现为A/A、不产气、不产硫化氢。A/A说明斜面和底层均呈酸性反应，提示其可利用培养基中的糖类产生酸；不产气表现为琼脂无裂隙、无气泡或上冲；H₂S阴性表现为无黑色沉淀。

鼠伤寒沙门氏菌和普通变形杆菌等可产生硫化氢的细菌通常出现黑色沉淀，可与小肠结肠炎耶尔森氏菌形成明显区别。福氏志贺氏菌常表现为K/A、不产气、不产硫化氢；粪产碱杆菌则常表现为K/K、不产气、不产硫化氢。通过这些质控菌株，可验证培养基对糖发酵、产气和H₂S反应的显示能力。

需要注意的是，改良克氏双糖铁琼脂只是生化鉴定体系中的一个项目，不能单独作为小肠结肠炎耶尔森氏菌最终确认依据。实际检验应结合菌落形态、纯化结果、其他生化反应、血清学或分子检测结果综合判断。

九、常见问题与原因分析

若目标菌反应不典型，应首先检查接种菌是否为纯培养物，接种量是否过大或过小，培养温度和培养时间是否符合要求。培养时间过长可能导致斜面因蛋白胨分解而转红，造成结果误判；培养时间不足则可能酸化不充分，导致反应不清晰。

若H₂S阳性菌不显黑，应检查硫代硫酸钠和柠檬酸铁铵是否失效、灭菌是否过度、pH是否异常，以及培养时间是否足够。若产气结果难以判断，可观察底层是否有裂隙、气泡、琼脂上冲或培养基断裂。高层斜面制作时底层不宜过浅，否则不利于观察底层酸化和产气表现。

十、贮存与注意事项

本品不得用于临床检验。干粉培养基使用后应立即密封，置于避光、干燥处保存，避免吸潮、结块和性能下降。称量时应注意粉尘防护，建议佩戴口罩并在通风良好的环境中操作。未开封产品在规定条件下保质期为三年；开封后受储存湿度、温度和使用频次影响，保质时间可能缩短。

制备好的高层斜面应按实验室验证条件保存，并在规定期限内使用。若斜面出现明显失水、开裂、污染、颜色异常或质控结果不符合要求，应停止使用并排查原因。检测后的带菌培养物、试管和接触样品的耗材，应经高压灭菌后再按实验室生物安全要求处理。

参考标准与资料

GB 4789.8-2016《食品安全国家标准 食品微生物学检验 小肠结肠炎耶尔森氏菌检验》。

相关SN食品微生物检验方法中小肠结肠炎耶尔森氏菌生化鉴定要求。