酪蛋白琼脂与动力培养基：蜡样芽胞杆菌鉴定中的两个关键试验

在食品微生物检验中，蜡样芽胞杆菌（Bacillus cereus）的分离计数通常以MYP琼脂或其他选择性培养基为基础，但典型菌落并不能直接作为最终确认依据。由于蜡样芽胞杆菌与蕈状芽胞杆菌、苏云金芽胞杆菌等近缘菌在形态和部分生化特征上较为接近，后续常需要结合酪蛋白水解试验、动力试验、溶血试验、镜检和其他生化鉴定项目综合判断。

酪蛋白琼脂和动力培养基就是蜡样芽胞杆菌鉴定中常用的两类辅助培养基。前者用于观察菌株是否产生酪蛋白酶，后者用于判断菌株是否具有运动性。二者结果虽然不能单独确认蜡样芽胞杆菌，但对区分蜡样芽胞杆菌群相关菌具有重要参考价值。

一、酪蛋白琼脂：观察菌株是否水解酪蛋白

酪蛋白琼脂用于检测细菌是否产生胞外蛋白酶，尤其是酪蛋白酶。培养基中加入酪蛋白后，整体呈乳浊或不透明状态。若菌株能够分泌酪蛋白酶，将酪蛋白分解为可溶性小分子肽和氨基酸，菌落周围培养基会出现澄清透明区，这就是酪蛋白水解阳性反应。

配制时，应将除指示剂外的各成分加入蒸馏水中加热溶解。需要特别注意的是，酪蛋白本身不完全溶解，培养基可呈均匀乳浊状态，这属于正常现象。校正pH后加入溴麝香草酚蓝指示剂，分装后121 ℃高压灭菌15 min。临用时加热融化琼脂，冷却至45 ℃～50 ℃后倾注平板。

二、酪蛋白水解试验如何判读？

试验时，用接种环挑取可疑菌落，接种于酪蛋白琼脂平板上，36 ℃±1 ℃培养48 h±2 h。若菌落周围出现明显澄清透明区，说明菌株能够产生酪蛋白酶，判为阳性。若48 h未出现透明区，可继续培养至72 h后再观察。

酪蛋白水解结果受接种量、培养时间、培养基乳浊程度和菌株蛋白酶表达能力影响。平板背景应均匀，不应出现大片不规则透明区或沉淀团块，否则会干扰结果判断。阳性反应应以菌落周围局部透明圈为准。

三、动力培养基：判断菌株是否具有运动性

动力培养基属于半固体培养基，琼脂含量低于普通固体培养基，常用于观察细菌是否能从穿刺线向周围扩散生长。具有运动性的细菌可借助鞭毛在半固体培养基中移动，表现为沿穿刺线周围弥散生长；无运动性的细菌通常只沿穿刺线生长，周围培养基保持相对清晰。

制备时，将各成分加热溶解并定容至1000 mL，校正pH后分装，每管2 mL～3 mL。通常采用115 ℃高压灭菌20 min备用。琼脂浓度是动力培养基的关键参数，过高会限制运动菌扩散，过低则培养基过软，穿刺线不稳定，均可能影响判读。

四、动力试验如何操作和判读？

试验时，用接种针挑取新鲜培养物，沿培养基中央垂直穿刺接种，避免左右摆动造成假性扩散。接种后于30 ℃±1 ℃培养48 h±2 h，观察菌体是否沿穿刺线向周围扩散。

蜡样芽胞杆菌通常具有运动性，在动力培养基中可沿穿刺线向外呈扩散生长。蕈状芽胞杆菌常呈绒毛状生长，并形成蜂巢状或根状扩散外观。蜡样芽胞杆菌和苏云金芽胞杆菌通常运动较活泼，而炭疽芽胞杆菌通常不运动。动力试验也可采用悬滴法观察，但显微镜观察需要新鲜培养物和规范制片。

需要注意的是，动力试验受培养温度、培养时间、琼脂浓度、穿刺方式和菌龄影响。菌龄过老或培养条件不适宜时，运动性可能减弱；接种针偏斜或抽出时晃动，则可能造成沿针道周围人为扩散，误判为阳性。

五、酪蛋白水解与动力试验在鉴定中的定位

酪蛋白琼脂和动力培养基都属于辅助鉴定培养基。酪蛋白水解阳性说明菌株具有分解酪蛋白的蛋白酶活性；动力阳性说明菌株具有运动能力。对于蜡样芽胞杆菌检验，这些结果应与MYP琼脂典型菌落、革兰氏染色、芽胞形态、溶血反应、生化鉴定或其他确认方法联合判断。

因此，在实际检验中，不宜把单一阳性或阴性结果作为最终判断依据。特别是蜡样芽胞杆菌群内部成员遗传关系接近，表型差异有时并不稳定，必要时应采用标准规定或实验室认可的方法进行综合确认。

六、常见问题与控制建议

七、培养基质量控制要点

酪蛋白琼脂应重点控制酪蛋白分散性、pH、凝胶强度、无菌性和阳性反应清晰度。合格平板应呈均匀乳浊背景，阳性菌株接种后能形成可辨认的透明圈，阴性菌株不应出现明显水解区。

动力培养基应重点控制琼脂含量、pH、装量和半固体状态。每管2 mL～3 mL的装量有助于观察穿刺线和扩散情况。质控时应设置运动阳性菌和运动阴性菌，确认阳性菌可扩散生长，阴性菌仅沿穿刺线生长。

对于培养基生产企业而言，这两类培养基虽然配方简单，但对物理状态要求较高。酪蛋白琼脂的乳浊均匀性和动力培养基的半固体强度，都会直接影响结果判读。

小结

酪蛋白琼脂用于检测菌株是否产生酪蛋白酶，阳性表现为菌落周围出现澄清透明区；动力培养基用于检测菌株是否具有运动性，阳性表现为菌体从穿刺线向周围扩散生长。二者是蜡样芽胞杆菌鉴定中的重要辅助试验，可帮助实验室从蛋白水解能力和运动性两个角度评价可疑菌株。

实际应用中，应使用新鲜纯培养物，严格控制培养基pH、琼脂浓度、接种方式、培养温度和观察时间。酪蛋白水解和动力试验均不能单独作为蜡样芽胞杆菌最终确认依据，应与MYP平板表现、形态观察、溶血反应和其他生化鉴定结果综合判断。