硝酸盐蛋白胨水培养基：用于硝酸盐还原产气试验的生化鉴定培养基

一、产品用途与基本信息

二、配方组成、用量及作用

三、检验原理

硝酸盐还原是细菌常见的生化反应之一。部分细菌可将硝酸盐还原为亚硝酸盐，少数细菌还可继续将亚硝酸盐进一步还原为氮气或其他含氮气体。硝酸盐蛋白胨水培养基中的硝酸钾提供硝酸盐底物，亚硝酸钠提供亚硝酸盐底物，蛋白胨和酵母膏粉则为细菌生长提供必要营养。

在该培养基中放置小倒管，是为了捕集培养过程中产生的气体。培养后若小倒管内有明显气泡或气体积聚，说明测试菌株具有将硝酸盐或亚硝酸盐进一步还原并产气的能力。铜绿假单胞菌等细菌可表现为生长良好并产气，而大肠埃希氏菌、单增李斯特氏菌等质控菌株在该体系中通常表现为生长良好但不产气。

需要特别说明的是，普通硝酸盐还原试验常通过加入硝酸盐还原试剂观察是否生成亚硝酸盐；而本产品配方中本身含有亚硝酸钠，因此不适合直接按普通“硝酸盐还原显色试验”的逻辑判读。其核心观察指标应为小倒管产气，而不是单纯显色反应。

四、使用方法

称取本品15.5 g，加入蒸馏水或去离子水1 L，搅拌加热至完全溶解，分装试管，并在每支试管内加入洁净小倒管。分装后于115 ℃高压灭菌20 min，冷却后备用。

接种时挑取纯培养菌落接入培养基中，按方法要求于35～37 ℃培养48 h。培养结束后观察肉汤生长情况及小倒管内是否有气体。观察产气时应避免将小倒管中原有空气误判为阳性，因此分装和灭菌后小倒管应尽量充满培养液，无明显残留气泡。

五、质量控制

六、结果判读

如果测试菌株生长良好但不产气，应记录为产气阴性；若菌株不生长，则不能直接判定为产气阴性，应先排查培养基、菌株活性、接种量和培养条件。对于生化鉴定用途，产气结果需结合菌落形态、氧化酶、革兰氏染色、其他生化反应或分子鉴定结果综合判断。

七、常见问题与原因分析

若铜绿假单胞菌质控菌株不产气，应重点检查小倒管是否正确放置、培养基是否漏加或失效、pH是否符合要求、灭菌温度是否过高、菌株活性是否正常以及培养时间是否足够。产气反应通常需要良好生长作为基础，接种菌过老、菌量过少或培养条件不合适都可能导致假阴性。

若阴性菌株出现产气，应首先排查污染、误接种、小倒管残留空气和培养基分装问题。小倒管初始气泡是最常见的误判原因之一，因此灭菌冷却后应检查倒管是否充满液体。若倒管内本身已有气泡，不宜用于产气判读。

若培养基灭菌后颜色加深、沉淀明显或pH偏移，可能与过度加热、水质不合格、干粉吸潮或储存不当有关。该培养基采用115 ℃高压灭菌20 min，而非121 ℃常规灭菌条件，主要是为了减少成分受热变化，实际操作中不建议随意提高灭菌温度或延长灭菌时间。

八、与普通硝酸盐还原试验的区别

硝酸盐还原试验可有不同设计：一种是观察硝酸盐是否被还原为亚硝酸盐，常需加入显色试剂；另一种是观察细菌是否能将硝酸盐或亚硝酸盐进一步还原并产生气体。本产品因含硝酸钾和亚硝酸钠，并配合小倒管使用，更适合用于产气型还原反应观察。

九、贮存与注意事项

本品不得用于临床检验。干粉培养基使用后应立即密封，置于避光、干燥处保存，避免吸潮、结块和性能下降。称量时应注意粉尘防护，建议佩戴口罩并在通风良好的环境中操作。未开封产品在规定条件下保质期为三年；开封后受储存湿度、温度和使用频次影响，保质时间可能缩短。

配制后的培养基应按实验室验证条件保存，并在规定期限内使用。若试管出现污染、明显沉淀、pH异常、小倒管气泡过多或质控结果不符合要求，应停止使用并排查原因。检测后的带菌培养物、试管和接触样品的耗材，应经高压灭菌后再按实验室生物安全要求处理。

参考标准与资料

GB 15979-2024《一次性使用卫生用品卫生要求》。

相关卫生用品、化妆品及微生物检验方法中铜绿假单胞菌硝酸盐还原产气试验要求。